MicroRNA-26b通过靶向调控CDC6表达抑制胃癌细胞增殖、侵袭能力的实验研究

发布时间：2024-03-17 14:02

　　研究背景:胃癌是世界上最为常见的恶性肿瘤之一,由于较高的发病率与死亡率,其已经成为目前威胁我国人民生命与健康的严重问题。根治性R0手术切除与充分的淋巴结清扫是目前唯一可能使胃癌达到治愈的治疗手段。然而,由于早期缺乏明显的临床症状及阳性体征,多数病人在确诊为胃癌时以处于疾病的进展期,大大影响了病人的治疗效果。另一方面,即便接受了根治性手术,仍然有很大一部分病人在术后短期内出现了肿瘤的复发与转移,这使得胃癌病人预后依然无法令人满意。尽管传统的肿瘤标志物检测,如血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原CA19-9、糖类抗原CA125等已广泛应用于临床,但对于胃癌的诊断而言仍缺乏足够的特异性与敏感性。因此,寻找新的、更为敏感的诊断标志物与预后分子,对于提高胃癌早期诊断的成功率、监测肿瘤的复发与转移,揭示胃癌发生发展涉及的分子机制具有非常重要的意义。细胞分裂周期蛋白6(Cell division cycle 6,CDC6)位于人类染色体17q21.3,是真核细胞DNA复制起始必需的调控蛋白。研究发现CDC6的主要功能是参与DNA复制前复合体(pre-replication complex,pre-RC)...

【文章页数】：107 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 MiR-26b在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞增殖、侵袭能力影响的实验研究
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验资料
            2.1.1 胃癌组织标本的收集及病人的临床病理特征
            2.1.2 主要实验试剂
            2.1.3 主要实验仪器与设备
        2.2 实验方法
            2.2.1 组织、细胞RNA的提取与反转录
            2.2.2 荧光实时定量 PCR(real-time quantitative PCR, RT-PCR)
            2.2.3 细胞系的复苏、培养与传代
            2.2.4 过表达miR-26b细胞系的建立
            2.2.5 MTS实验
            2.2.6 细胞凋亡实验
            2.2.7 Transwell 细胞侵袭实验
            2.2.8 荧光素酶报告基因实验(luciferase reporter gene assay)
            2.2.9 数据处理与统计学分析
    3 实验结果
        3.1 miR-26b在胃癌组织及细胞中的表达情况
        3.2 miR-26b表达与胃癌病人临床病理资料的关系
        3.3 miR-26b对细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响
        3.4 miR-26b靶基因的预测及验证
    4 讨论
    5 结论
第二部分 CDC6在胃癌组织中的表达,对胃癌细胞生物学功能的影响及其与MiR-26b调控关系的研究
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验资料
            2.1.1 主要实验试剂
            2.1.2 主要实验仪器与设备
        2.2 实验方法
            2.2.1 免疫组织化学染色
            2.2.2 细胞系的培养与传代
            2.2.3 细胞RNA的提取与反转录
            2.2.4 荧光实时定量 PCR(real-time quantitative PCR, RT-PCR)
            2.2.5 Western blot
            2.2.6 建立沉默CDC6的胃癌细胞系
            2.2.7 MTS实验
            2.2.8 细胞凋亡实验
            2.2.9 Transwell细胞侵袭实验
            2.2.10 数据处理与统计学分析
    3 实验结果
        3.1 CDC6在胃癌组织及胃癌细胞系中的表达情况
        3.2 CDC6表达水平与胃癌病人临床病理资料之间的关系
        3.3 miR-26b与 CDC6在胃癌组织中表达的相关性
        3.4 干扰沉默CDC6对胃癌细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响
        3.5 恢复CDC6表达对过表达miR-26b细胞增殖、侵袭能力的影响
    4 讨论
    5 结论
参考文献
本研究创新性的自我评价
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3931137