骨桥蛋白在非小细胞肺癌中的表达及意义

发布时间：2024-05-07 22:12

　　目的本研究通过RNA干扰技术靶向干预OPN基因,观察OPN基因下调后非小细胞肺癌细胞株A549、SK-MES-1和OPN基因过表达后非小细胞肺癌细胞株H1703的生物学行为变化,并探讨其相关机制,为非小细胞肺癌的临床治疗提供实验基础。方法通过免疫组化、实时荧光定量PCR方法对28例Ⅰ/Ⅱ期NSCLC及73例Ⅲ/Ⅳ期NSCLC组织中的OPN的表达进行检测,分析OPN表达与临床病理参数的相关性。Western blotting检测OPN在肺癌细胞株A549、SK-MES-1、H1703和永生化人支气管上皮细胞16HBE中的表达,通过RNA干扰技术下调A549及SK-MES-1细胞株的OPN表达,对H1703细胞株的OPN进行过表达,采用MTT 比色法、Transwell侵袭试验检测各细胞系对顺铂的敏感性及侵袭能力,通过Western blotting方法检测RNA干扰后A549、SK-MES-1细胞系LDHA的表达水平,并观察乳酸水平对A549、SK-MES-1细胞系顺铂敏感性的影响。结果1、OPN在肺癌组织中的表达明显高于正常组织,并与NSCLC的转移状态、分化程度及对顺铂的敏感性相关。...

【文章页数】：94 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
绪论
    参考文献
第一部分 OPN在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义
    材料与方法
        1、病例资料及标本来源
        2、实验设备
        3、实验试剂
        4、肺癌组织石蜡切片的制作
        5、苏木精-伊红染色
        6、免疫组织化学染色
        7、肺癌组织RNA提取步骤
        8、RNA反转录cDNA第一链的合成
        9、qPCR操作步骤
        10、统计学分析
    结果
    讨论
    小结
第二部分 RNA干扰OPN基因对人非小细胞肺癌A549、SK-MES-1及H1703细胞生物学行为的影响
    材料与方法
        1、实验材料
        2、实验试剂
        3、相关实验试剂的配置方法
        4、实验细胞
        5、细胞复苏
        6、细胞传代
        7、细胞冻存
        8、siRNA的设计及慢病毒载体的构建
        9、siRNA转染步骤
        10、Western Blot方法检测细胞中OPN表达
        11、MTT分析
        12、Transwell侵袭实验
    结果
        1、RNA干扰前后A549、SK-MES-1、H1703细胞OPN表达水平的变化
        2、RNAi干扰后对A549、SK-MES-1、H1703细胞增殖能力的影响
        3、下调OPN对A549、SK-MES-1细胞侵袭能力的影响
        4、RNAi后A549、SK-MES-1、H1703细胞对顺铂敏感性的变化
    讨论
    小结
第三部分 OPN参与非小细胞肺癌细胞顺铂耐药的机制研究
    材料和方法
        1、实验材料
        2、实验试剂
        3、相关实验试剂的配置方法
        4、实验细胞
        5、细胞复苏
        6、细胞传代
        7、细胞冻存
        8、siRNA细胞转染
        9、乳酸测试盒测定细胞乳酸产生
        10、MTT分析
        11、Western Blot方法检测细胞中OPN表达
    结果
        1、数据库筛选
        2、OPN下调后A549、SK-MES-1细胞中OPN与LDHA蛋白表达
        3、OPN下调后A549、SK-MES-1细胞中乳酸生成
        4、OPN下调后乳酸对A549、SK-MES-1细胞顺铂敏感性的影响
    讨论
    小结
全文总结
参考文献
综述
    参考文献
攻读博士期间发表文章
英文缩略词表
致谢



本文编号：3967062