MiRNA-451调控c-Myc在三阴性乳腺癌侵袭转移作用的研究

发布时间：2024-09-17 19:29

　　目的:分别观察miRNA-451、c-Myc以及E-cadherin在三阴性乳腺癌、癌旁组织中的表达情况以及相互关系,验证miRNA-451与c-Myc表达之间可能存在的调控关系,通过慢病毒转染,观察miRNA-451不同表达水平下c-Myc、E-cadherin蛋白表达变化,以及调控c-Myc表达对三阴性乳腺癌细胞增殖活性、细胞迁移、侵袭能力以及细胞周期、凋亡的影响。方法:(1)收集2016-08至2018-02新疆医科大学附属肿瘤医院三阴性乳腺癌标本16例,采用自身配对的方式对乳腺癌组织以及癌旁组织中作为实验组以及对照组PCR方法和Western Blot检测miRNA-451、c-Myc及E-cadherin的基因、蛋白表达水平;(2)首先构建c-Myc 3’UTR野生及突变质粒,生物信息方法分析并预测可能的转录因子结合位点,PCR方法扩增c-Myc基因3’-UTR序列,连接于荧光素酶报告检测各组荧光素酶活性,以海肾荧光素酶作为对照,检测细胞干预前后萤光素酶变化情况。双荧光素酶报告结果,以萤火虫/海肾荧光素酶比值表示;(3)构建稳定的MDA-MB-231细胞,培养稳定传代2-3代后...

【文章页数】：115 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图1-1RNA电泳图

表7结果说明:RNA样本A260/A280的比值是一种RNA纯度检测方法,比值范围为1.8-2.1的RNA样本视为合格。图1结果说明:图中的电泳图中,28S与18S亮度较高,5S最弱或无条带,条带单一完整,视为合格RNA样本。

图1-2PCR引物鉴定电泳图

2.1.2PCR产物电泳图图2结果说明:图中分别鉴定了检测基因c-Myc、E-cadherin以及内参基因Actin的PCR产物大小(产物大小依循表5),图中的PCR产物大小符合检测基因的片段长度,产物条带单一,其中E-cadherin基因由于本底表达水平较低,所以PCR产物显....

图1-3三阴性乳腺癌与癌旁组织基因表达量

2.1.4c-Myc、miRNA-451以及E-cadherin在乳腺癌患者临床资料之间的表达差异2.2WesternBlot检测结果

图1-4目的蛋白条带拼接图

2.2.2蛋白检测结果图1结果说明:图中分别鉴定了检测目的蛋白c-Myc、E-cadherin以及内参蛋白β-actin的western结果,图中的条带大小符合目的蛋白的大小。

本文编号：4005935