毒力因子SapM（Rv3310）促进巨噬细胞中结核分枝杆菌存活的分子机制

发布时间：2025-01-20 17:36

　　结核病（TB）是由结核分枝杆菌（Mtb）感染引起的慢性传染性疾病。近年来,由于人口流动性增加,艾滋病蔓延以及Mtb耐药菌株出现等,全球结核病疫情日益加重,全球每年新发结核病例1000万人,死亡人数高达150万,居致死性感染疾病之首。目前中国结核病死亡人数为3.7万,处于结核病高负担国家前列,因此,结核防治是我国仍需面临的重大公共卫生问题。巨噬细胞是Mtb进入机体的第一道防线,然而讽刺的是,Mtb经长期进化已形成多种调控机制抵御巨噬细胞的杀伤（如抑制吞噬、降低自噬、阻碍凋亡、抑制炎症等）,使得巨噬细胞不仅丧失了清除Mtb的能力,甚至沦为Mtb躲避机体免疫应答的避难所。近年来,诸多毒力因子被报道参与Mtb免疫逃逸,这些分子通过调控巨噬细胞的免疫功能,增加Mtb在宿主中的生存。然而,Mtb毒力因子的免疫逃逸机制尚不完全清楚。因而,深入探究毒力因子在巨噬细胞中的功能,既可为研究新型结核疫苗寻找潜在的抗原,又可为预防和治疗结核病的药物提供新的靶点。SapM是Mtb重要的分泌型毒力因子,是由H37Rv的3310位基因编码的一种酸性磷酸酶,主要催化P13P。研究表明,Mtb感染吞噬细胞后,SapM能够...

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【学位级别】：博士

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中文摘要
ABSTRACT
引言
第一部分 毒力因子SapM促进Mtb在巨噬细胞中的生存
    前言
    材料与方法
        一、实验材料
        二. 实验方法
    结果
        一. Mtb毒力因子SapM蛋白表达纯化及其多克隆抗体的制备
        二. SapM过表达耻垢分枝杆菌(Ms::SapM)的构建及鉴定
        三. H37RvΔSapM的敲除菌株及H37RvΔSapM::SapM回补菌株的构建及鉴定
        四. SapM巨噬细胞稳转株(RAW-SapM)的构建及鉴定
        五. SapM促进巨噬细胞中分枝杆菌的存活
        六. 体内实验:SapM显著增加感染小鼠肺部细菌载量的增加
    讨论
第二部分 SapM通过抑制Mtb感染的巨噬细胞自噬促进结核分枝杆菌的存活
    前言
    材料与方法
        一、实验材料
        二. 实验方法
    结果
        一. SapM抑制雷帕霉素诱导的巨噬细胞发生自噬
        二. SapM有效抑制Ms感染的巨噬细胞发生自噬
        三. SapM有效抑制感染Mtb的巨噬细胞发生自噬
        四. 体内实验:SapM抑制Ms感染的小鼠肺内细胞发生自噬
        五. SapM对巨噬细胞自噬的抑制始于起始阶段
        六. SapM对巨噬细胞自噬的抑制作用依赖其磷酸酶活性
    讨论
第三部分 SapM通过激活mTOR的活性抑制巨噬细胞自噬的起始阶段
    前言
    材料与方法
        一、实验材料
        二. 实验方法
    结果
        一. SapM可直接结合自噬起始相关分子mTOR
        二. SapM通过激活mTOR的活性抑制巨噬细胞自噬的起始
        三. mTOR结合SapM的功能域分析
        四. SapM结合的mTOR功能域分析
    讨论
总结
参考文献
附录 综述
    参考文献
缩略词
攻读学位期间发表的论文及参加学术会议情况
致谢



本文编号：4029451