Group2流感病毒中和抗体的制备和特征性结构的发现及功能分析

发布时间：2025-01-20 17:52

　　流行性感冒(Influenza)是流感病毒导致的强传染性疾病,一直是人类健康的重大威胁,对人类社会造成重大经济损失。世界范围内每年约有5%-15%的人口受季节性流感病毒感染,其中有25-50万人死亡。由于小分子药物及季节疫苗的局限性,寻求新的治疗及预防手段迫在眉睫。已报道的流感抗体的识别表位主要分为三种。类型一是以FI6v3,CR6261,F10,CR9114以及39.29等为代表,识别表位位于血球凝集素(HA)的融合亚结构域,包括HA1 N端和C端构成的上部和左侧,HA2 Helix A构成右侧,HA2融合肽C端构成下部。CR6261,F10只能中和Group1的流感病毒,而FI6v3,39.29及CR9114却既能中和Group1又能中和Group2的流感病毒。类型二以CR8020为代表,识别表位更加接近于HA的膜结合部位,包括Helix A序列前的βsheet及HA2上的融合肽,只能中和Group2的流感病毒。除此之外,类型三兼具以上两种类型抗体的识别表位,以MEDI8852及本实验室早期研发的3E1为代表。MEDI8852被报道能广谱性的中和Group1和Group2的流感病毒,...

【文章页数】：112 页

【学位级别】：博士

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摘要
abstract
第1章 引言
    1.1 流感病毒简介
        1.1.1 流行性感冒简介
        1.1.2 流感病毒的基本结构及分类
        1.1.3 流感病毒的生活史
        1.1.4 流感病毒的抗原漂变及抗原转变
        1.1.5 流感病毒表面糖蛋白血凝素的结构及变构
    1.2 目前预防和治疗流感的主要策略
        1.2.1 流感病毒疫苗的研发状况及利弊
        1.2.2 流感病毒小分子药物的研发状况及利弊
    1.3 流感病毒广谱中和抗体的研究进展及发展趋势
        1.3.1 流感病毒广谱中和抗体的主要研究进展
        1.3.2 已经在进行临床试验的流感病毒抗体药物
    1.4 流感病毒广谱中和抗体的应用价值及未来研究方向
第2章 实验材料及实验方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 疫苗
        2.1.3 伦理
        2.1.4 质粒、菌株及细胞
        2.1.5 抗体及蛋白
        2.1.6 流感病毒
        2.1.7 试剂耗材
        2.1.8 基因序列
        2.1.9 实验所用溶液
        2.1.10 实验仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 特异性记忆B细胞的获得
        2.2.2 抗体表达与纯化
        2.2.3 ELISA检测抗体结合抗原的活性
        2.2.4 抗体亲和力(KD值)检测
        2.2.5 病毒TCID₅₀测定
        2.2.6 病毒微中和实验
        2.2.7 动物实验
        2.2.8 抗体抑制HA0 酶切实验
        2.2.9 抗体抑制HA构象变化实验
        2.2.10 抗体抑制膜融合实验
        2.2.11 HA蛋白变性实验
        2.2.12 三聚体HA蛋白的表达与纯化
        2.2.13 凝胶过滤层析纯化蛋白
        2.2.14 12mAb Fab-HA复合物制备
        2.2.15 冷冻样品的制备、数据收集、单颗粒法三维重构及抗体同源建模
        2.2.16 统计分析
第3章 实验结果
    3.1 12 mAb的发现与制备
        3.1.1 志愿者血清学检测
        3.1.2 12 mAb的研发流程
        3.1.3 小结
    3.2 12 mAb的基本特征
        3.2.1 12 mAb的胚系基因信息总结
        3.2.2 体细胞突变对12mAb的亲和力的影响
        3.2.3 小结
    3.3 体外实验证实12mAb可以广谱性的中和Group2 的流感病毒
        3.3.1 12 mAb的体外结合活性及中和活性检测
        3.3.2 小结
    3.4 体内实验证实12mAb对 H3N2 流感病毒表现出很好的保护作用
        3.4.1 12 mAb对 H3N2 流感病毒的预防效果检测
        3.4.2 12 mAb对 H3N2 流感病毒的治疗效果检测
        3.4.3 小结
    3.5 12 mAb通过抑制HA蛋白的构象变化从而抑制病毒入侵宿主细胞
        3.5.1 12 mAb不能抑制流感病毒HA与宿主细胞表面唾液酸受体的结合
        3.5.2 12 mAb能抑制低pH诱导的病毒包膜与宿主胞膜的膜融合
        3.5.3 12 mAb能抑制HA0 的酶切及低pH值诱导的HA的构象变化
        3.5.4 小结
    3.6 12 mAb Fab-H3N2 HA复合物的冷冻电镜结构解析
        3.6.1 12 mAb Fab-HA复合物制备
        3.6.2 12 mAb Fab-H3N2 HA复合物的整体三维结构重构
        3.6.3 12 mAb相对于其它抗体的识别表位及作用方式更加独特
        3.6.4 小结
    3.7 12 mAb对 H3N2 流感病毒的结合及中和活性要优于MEDI
        3.7.1 12 mAb与 MEDI8852 对多株H3N2 流感病毒的结合活性检测
        3.7.2 12 mAb与 MEDI8852 对多株H3N2 流感病毒的中和活性检测
        3.7.3 小结
    3.8 12 mAb在 H3N2 HA的识别表位中包括一段线性序列
        3.8.1 12 mAb对线性的H3N2 HA依然具有很高的结合活性
        3.8.2 HA截短实验找到这段线性序列大约位于HA2的58-75 位氨基酸
        3.8.3 小结
    3.9 体内外实验发现12mAb对 H1N1 流感病毒也有中和活性
        3.9.1 12 mAb对 H1N1 流感病毒的结合活性及中和活性检测
        3.9.2 12 mAb对 H1N1 流感病毒的体内预防及治疗效果检测
        3.9.3 12 mAb抑制H1N1 流感病毒感染的作用机制
        3.9.4 12 mAb不能结合线性化的H1N1 HA蛋白
        3.9.5 小结
    3.10 12 mAb Fab-H1N1 HA复合物的冷冻电镜结构解析
        3.10.1 12 mAb Fab-H1N1 HA复合物制备
        3.10.2 12 mAb Fab-H1N1 HA复合物的整体三维结构重构
        3.10.3 12 mAb Fab在 H3N2 HA及 H1N1 HA中的识别表位不同
        3.10.4 小结
第4章 结论与讨论
    4.1 本课题的主要结论
    4.2 本课题的研究意义
第5章 展望
参考文献
附录
致谢
作者简历及攻读学位期间发表的学术论文及研究成果
专业综述
    参考文献



本文编号：4029470