Rack1调控P-glycoprotein活性促进乳腺癌细胞耐药的分子机制研究

发布时间：2025-02-11 11:53

　　目的:乳腺癌是危害全球女性健康的第一杀手,化疗在乳腺癌的治疗过程中占有重要地位。但是,多药耐药（Multi Drug Resistance,MDR）的出现导致化疗的失败,极大地限制了局部晚期和转移性乳腺癌的治疗效果。药物转运蛋白P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）能够将细胞内的化疗药物排出细胞外,其过量表达是MDR产生的主要原因之一。尽管在MDR细胞中关于P-gp的表达调控已被深入研究,但是目前对P-gp活性调控的研究还很少。Rack1（Receptor for Activated C Kinase 1）是细胞内的一种支架蛋白,介导不同蛋白质之间的相互作用,在肿瘤细胞抵抗化疗药物的过程中发挥重要作用。前期研究发现Rack1是P-gp的一个结合蛋白质,但是Rack1是否调控P-gp的转运活性,目前尚未可知。本研究中,我们利用多药耐药的乳腺癌细胞系,通过一系列体外细胞学实验,结合构建体内耐药移植瘤模型,明确耐药细胞中Rack1对P-gp转运泵活性的调控作用,并进一步探究Rack1调控P-gp活性的分子机制,为改善临床晚期耐药乳腺癌的治疗以及寻找新的治疗靶点提供线索。方法:1....

【文章页数】：120 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要 Abstract 缩略语/符号说明 前言
研究现状、成果
研究目的、方法 一、Rack1的表达增加耐药细胞对化疗药物的抵抗
1.1 对象和方法
    1.1.1 实验用细胞系和培养条件
    1.1.2 实验用仪器、试剂和耗材
    1.1.3 相关试剂配制
1.2 结果
    1.2.1 敲减Rack1的表达增加耐药细胞对表柔比星的敏感性
    1.2.2 敲减Rack1后不改变药物转运蛋白P-gp的表达水平
    1.2.3 敲减Rack1的表达减弱P-gp的转运活性
    1.2.4 敲减Rack1后增加化疗药物在细胞内的蓄积
1.3 讨论
1.4 小结 二、Src激酶活性促进肿瘤细胞耐药
2.1 对象和方法
    2.1.1 实验用细胞系和培养条件
    2.1.2 实验用仪器、试剂和耗材
    2.1.3 试剂配制
    2.1.4 实验方法
2.2 结果
    2.2.1 Src的表达促进细胞对化疗药物的抵抗
    2.2.2 下调Src的表达抑制P-gp的转运活性
    2.2.3 下调Src的表达增加表柔比星的胞内蓄积
    2.2.4 抑制Src激酶活性增加细胞对化疗药物的敏感性
    2.2.5 抑制Src激酶活性减弱P-gp的转运能力
    2.2.6 抑制Src激酶活性后增加化疗药物在细胞内的蓄积
2.3 讨论
2.4 小结 三、Rack1介导Src与 P-gp之间的相互作用
3.1 对象和方法
    3.1.1 实验用材料
    3.1.2 实验用仪器、试剂和耗材
    3.1.3 试剂配制
    3.1.4 实验方法
3.2 结果
    3.2.1 Rack1/Src/P-gp三者在乳腺癌耐药细胞中形成蛋白复合体
    3.2.2 Rack1的表达介导Src与 P-gp的相互作用,同时抑制Cav1与P-gp的结合
    3.2.3 Src的表达不影响Rack1与P-gp的相互作用,但能抑制Cav1与P-gp的结合
    3.2.4 表达Rack1^Y246F不能介导Src与 P-gp的相互作用,但能增强Cav1结合P-gp
    3.2.5 Src的激酶活性调控Cav1的磷酸化
    3.2.6 Src调控Cav1的磷酸化依赖于Rack1的表达
    3.2.7 磷酸化的Cav1减弱与P-gp的结合能力,促进P-gp转运活性
3.3 讨论
3.4 小结 四、拯救Rack1^WT的表达恢复肿瘤细胞对化疗药物的抵抗
4.1 对象和方法
    4.1.1 实验用材料
    4.1.2 实验用仪器、试剂和耗材
    4.1.3 试剂配制
    4.1.4 实验方法
4.2 结果
    4.2.1 耐药细胞中拯救Rack1^WT的表达,恢复对表柔比星的抵抗
    4.2.2 体内实验,敲减Rack1表达的肿瘤细胞对表柔比星的敏感性增加,经Rack1^WT拯救的肿瘤细胞对表柔比星的治疗产生抵抗
4.3 讨论
4.4 小结 全文结论 论文创新点 参考文献 发表论文和参加科研情况说明 综述 对肿瘤多药耐药与逆转肿瘤多药耐药的认识
综述参考文献 致谢 个人简历



本文编号：4033226