时钟蛋白REV-ERBα调控NLRP3炎症小体及溃疡性结肠炎的分子机制研究

发布时间：2025-03-15 03:38

　　目的:溃疡性结肠炎(UC)是炎症性肠病的一种,病情长且易反复发作,严重影响病人的生活质量。UC病人常伴有失眠和昼夜节律紊乱症状,这表明UC与生物钟关联密切。然而,UC是否受到生物钟的调控及其作用机制目前尚不明确。本论文研究旨在解析生物钟与UC之间的关联,阐明生物钟核心蛋白REV-ERBα对UC的调控效应及作用机制。具体研究目标如下:(1)建立小鼠UC模型,测定结肠基因表达谱,考察时钟基因表达变化;(2)建立生理型和基因型节律扰乱小鼠模型,评价节律扰乱对UC易感性的影响;(3)测定UC小鼠和节律扰乱小鼠中Rev-erbα的表达,并考察Rev-erbα基因敲除对UC易感性的影响;(4)明确REV-ERBα对UC的调控途径,阐明调控机制;(5)采用小分子激动剂靶向激活REV-ERBα,探讨REV-ERBα对UC的预防和治疗作用。方法:1.以C57BL/6J小鼠为实验对象,采用葡聚糖硫酸钠(DSS)构建小鼠UC模型。采用转录组测序技术测定UC模型小鼠和正常小鼠结肠基因在六个昼夜时点的表达。筛选UC小鼠和正常小鼠结肠的节律基因。进一步分析小鼠结肠中主要时钟基因的变化趋势,并采用荧光定量PCR(q ...

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

图1-2.生物钟与疾病。

时辰治疗学根据生理和病理的昼夜变化规律来寻找药物(包括中药)疗效高,毒性低的治疗时间。中医很早就形成了“择时用药”理论,选择在最优的时间段用药对疾病的治疗大有裨益。2生物钟蛋白REV-ERB

图6-1.动物实验方案图。(A)野生型小鼠肝脏REV-ERBα的节律表达。(B)UC造模前给药SR9009的动物实验方案。(C)UC造模后给药SR9009的动物实验方案。

REV-ERBα蛋白在一天中于ZT8表达量最高(图6-1A),因此SR9009给药的时间点设置为ZT8。对于SR9009对小鼠UC预防作用实验,先使用SR9009(50mg/kg)于ZT8每天经腹腔给药一次(图6-1B)。SR9009连续给七天后,各组小鼠同时给予2.5%DSS....

图6-2.REV-ERBα激活缓解小鼠UC病情。(A)给予DSS的四组小鼠的体重丢失情况检测。(B)给予DSS的四组小鼠的DAI评分。(C)SR9009处理和对照小鼠的生存率(log-rank检验)。(D)给予DSS的四组小鼠的结肠长度。在解剖时测量结肠长度。(E)结肠H&E染色代表图。比例尺=100μm。(F)给予DSS的四组小鼠的组织学病理评分。(G)小鼠于第8 天的结肠MPO活性。(H)qPCR检测UC小鼠于第8 天的全结肠组织中Nlrp3、IL-1β和IL-18的表达。(I)ELISA法检测经DSS喂养的小鼠于第8 天结肠IL-18蛋白水平。(J)免疫印迹法检测UC小鼠于第8 天PMs或结肠中NLRP3、IL-1β和β-Actin的表达。SR,SR9009。

我们首先评价了REV-ERBα激动剂SR9009对野生型小鼠UC的预防作用。野生型小鼠于DSS造模前连续给予SR9009(或溶剂对照)七天。与溶剂对照处理组的小鼠相比,SR9009处理组的小鼠体重损失更少、DAI评分更低、生存率更高,结肠长度更长(图6-2A-D)。SR9009给....

图6-3.SR9009对Rev-erbα敲除的UC小鼠无预防作用。(A)给予DSS,使用SR9009或溶剂对照处理的Rev-erbα-/-小鼠的体重丢失情况测量。(B)给予DSS,使用SR9009或溶剂对照处理的Rev-erbα-/-小鼠的DAI评分。(C)给予DSS,使用SR9009或溶剂对照处理的Rev-erbα-/-小鼠的的生存率(log-rank检验)。(D)给予DSS并经SR9009或溶剂对照处理的Rev-erbα-/-小鼠的结肠长度。解剖后测量结肠长度。(E)结肠H&E染色代表图。比例尺=100μm。(F)给予DSS,使用SR9009或溶剂对照处理的Rev-erbα-/-小鼠的组织学病理评分。(G)小鼠于第8 天的结肠MPO活性。(H)qPCR检测UC小鼠于第8 天的全结肠组织中Nlrp3、IL-1β和IL-18的表达。(I)ELISA法检测给予DSS的小鼠于第8天结肠IL-18蛋白水平。(J)免疫印迹法检测UC小鼠于第8 天结肠中NLRP3、IL-1β和β-Actin的表达。SR,SR9009。

我们进一步评价了SR9009对Rev-erbα敲除小鼠UC发病的影响。Rev-erbα-/-小鼠于DSS造模前连续7天给予SR9009(或溶剂对照)。实验结果表明,SR9009处理组和溶剂对照组在小鼠体重、DAI评分、生存率、结肠长度、组织病理学评分和MPO活性等指标方面无明显差....

本文编号：4035099