C-反应蛋白通过对T细胞分化的直接调控参与后天免疫应答

发布时间：2017-06-11 04:03

  本文关键词：C-反应蛋白通过对T细胞分化的直接调控参与后天免疫应答，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：C-反应蛋白(C-reactive protein, CRP)是当机体出现炎症反应或者组织损伤时,在血液中出现的一种急性期蛋白,其在临床上经常作为一种炎症反应的非特异性标示。长期以来,CRP是作为一种可溶性的模式识别分子,是机体内出现的最早的保护机制之一,最重要的功能就是参与宿主防御、阻止病原体入侵,进而在先天免疫系统中发挥重要功能。CRP可以识别外来抗原和自身抗原,通过结合单核细胞和者巨噬细胞表面的Fc7受体,促进外来病原体的清除,在体内发挥清道夫的功能；同时CRP可以活化经典的补体系统,但最终并不会形成膜攻击复合物,进而对机体的免疫系统发挥调理作用,所以早期的研究认为CRP是先天免疫系统中的关键分子,主要参与先天免疫应答。然而,近年来随着CRP与动脉粥样硬化(AS)等心血管疾病和类风湿性关节炎(RA)、系统性红斑狼疮(SLE)和多发性硬化(MS)等自身免疫病的研究发现,CRP在这些疾病中所发挥的功能,已经不仅仅停留在先天免疫范畴,CRP在后天免疫应答中也可能具有一定的作用。尤其是在2002年-2007年间,Alexander J. Szalai等人在一些自发性和诱导性的自身免疫疾病小鼠中,比如EAE、SLE等,单次注射CRP或者CRPtg小鼠可以逆转这些疾病的发生,使得小鼠的存活延长,并且在小鼠发病前或者发病后注射CRP都是有效果的。遗憾的是这些动物模型研究仅仅是通过对小鼠病情变化程度的评估,证实了CRP对这些疾病的逆转作用的存在,至于CRP注射进体内后到底是和谁发生了相互作用,是通过直接的方式参与后天免疫应答还是通过一种间接地方式来影响后天免疫应答,目前并没有明确的结果。发掘CRP在后天免疫系统中的功能,就是我们的研究目标。首先,我们通过流式细胞术和免疫荧光发现CRP可以与Jurkat T细胞和Mouse Naive T细胞表面发生结合,而且这种结合是不依赖于传统己知的CRP受体,用EDTA/PC洗脱和酶消化实验证实这种结合不依赖于钙离子的存在且对PC不敏感,推测很可能是一种新的CRP受体；其次,通过Real time PCR和细胞因子ELISA发现,CRP刺激T细胞后可以改变T细胞分泌细胞因子的能力,表现为促进IL-4的分泌、而抑制IFN-gamma的分泌,进而推测CRP可能直接影响Th分化,随后就通过流式在单细胞水平上证明了CRP确实可以影响到Thl/Th2的分化；再次,我们对CRP调控Thl/Th2分化所涉及的分子机制进行了一定探讨,检测与Th1/Th2分化相关的转录因子T-bet、GATA-3、p-STAT-1、p-STAT-4和p-STAT-6的表达情况,发现IL-2/IL-2R信号可能参与到CRP与Thl/Th2的应答中；最后,我们在EAE疾病动物模型小鼠的在体实验中发现,单次注射CRP或者CRP转基因小鼠都可以使小鼠EAE病情得到明显的缓解,与此同时存在着Thl分化的压制和Th2分化的增强,并且Thl/Th2的应答无关于EAE是否已经形成,进而证明了CRP确实可以通过对Thl/Th2分化的调整来逆转小鼠病情,从而对一些自身免疫疾病的控制与治疗提供一些理论上的指导。
【关键词】：C-反应蛋白 后天免疫 受体结合 EAE模型 T细胞分化
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R392
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-12
• 第一章 绪论12-41
• 1.1 C-反应蛋白概览12-20
• 1.1.1 CRP的合成与表达调控12-14
• 1.1.1.1 CRP的合成12-13
• 1.1.1.2 CRP的表达调控13-14
• 1.1.2 CRP的结构特征14-16
• 1.1.2.1 CRP基本结构14
• 1.1.2.2 CRP的常见配体14-15
• 1.1.2.3 CRP的传统受体15-16
• 1.1.3 CRP的生物学功能16-20
• 1.1.3.1 CRP与炎症应答16-18
• 1.1.3.1.1 CRP通过补体活化防止细菌感染17
• 1.1.3.1.2 CRP通过FcγR/FcαR调控吞噬作用17-18
• 1.1.3.2 CRP与自身免疫疾病18-19
• 1.1.3.3 CRP与心血管疾病19-20
• 1.2 Th分化20-26
• 1.2.1 Th1分化21-22
• 1.2.2 Th2分化22-23
• 1.2.3 Th17分化23-24
• 1.2.4 Treg分化24
• 1.2.5 Tfh分化24-25
• 1.2.6 Th亚型之间的相互关系25-26
• 1.3 研究目的26-29
• 1.3.1 课题立意26-28
• 1.3.2 课题意义28-29
• 1.4 实验材料和方法29-41
• 1.4.1 实验材料29-30
• 1.4.1.1 实验细胞及动物29
• 1.4.1.2 实验所用蛋白29
• 1.4.1.3 实验主要试剂29
• 1.4.1.4 实验主要仪器29-30
• 1.4.2 实验方法30-41
• 1.4.2.1 小鼠脾脏CD4+T细胞分离30
• 1.4.2.2 小鼠脾脏Naive T细胞分离30-31
• 1.4.2.3 高纯度CRP的制备31-32
• 1.4.2.4 生物素标记CRP制备32
• 1.4.2.5 Real time PCR32
• 1.4.2.6 细胞因子ELISA32-33
• 1.4.2.7 Jurkat和Naive T电转染实验33
• 1.4.2.8 Th1/Th2体外分化实验33-34
• 1.4.2.9 T细胞增殖实验34-35
• 1.4.2.10 FCM检测Th1/Th2分型35
• 1.4.2.11 免疫印迹(WB)实验35-36
• 1.4.2.12 CRP与活T细胞结合实验36
• 1.4.2.13 免疫荧光36-37
• 1.4.2.14 CRP突变体构建及转染37
• 1.4.2.15 双色免疫组化37-38
• 1.4.2.16 EAE动物模型诱导38
• 1.4.2.17 小鼠心脏灌注38-39
• 1.4.2.18 小鼠脊髓的HE染色39
• 1.4.2.19 小鼠脊髓的LFB染色39-40
• 1.4.2.20 小鼠CNS区淋巴细胞分离40-41
• 第二章 正文部分41-83
• 2.1 整个实验的质控标准41-42
• 2.1.1 背景介绍41
• 2.1.2 研究方法41-42
• 2.1.3 结果及分析42
• 2.2 CRP与T细胞的结合实验42-50
• 2.2.1 背景回顾42-43
• 2.2.2 研究思路与方法43-44
• 2.2.3 实验结果与分析44-50
• 2.3 CRP在T细胞上传统受体的检测50-53
• 2.3.1 背景回顾51
• 2.3.2 研究思路与方法51
• 2.3.3 实验结果与分析51-53
• 2.4 CRP对T细胞功能影响53-58
• 2.4.1 背景回顾54
• 2.4.2 研究思路与方法54
• 2.4.3 实验结果与分析54-58
• 2.5 CRP对Th1和Th2分化的影响58-64
• 2.5.1 背景回顾58
• 2.5.2 研究思路与方法58-59
• 2.5.3 实验结果与分析59-64
• 2.6 CRP预孵育对Th1/Th2分化的影响64-66
• 2.6.1 背景回顾64
• 2.6.2 实验思路与方法64-65
• 2.6.3 实验结果与分析65-66
• 2.7 CRP对分化好的Th1和Th2的相互作用66-68
• 2.7.1 背景回顾66-67
• 2.7.2 研究思路与方法67
• 2.7.3 实验结果与分析67-68
• 2.8 CRP对CD4+T细胞的应答反应68-70
• 2.8.1 背景回顾68
• 2.8.2 研究思路与方法68
• 2.8.3 实验结果与分析68-70
• 2.9 CRP对Th1和Th2分化中其他关键因子的影响70-72
• 2.9.1 背景回顾70
• 2.9.2 研究思路与方法70-71
• 2.9.3 实验结果与分析71-72
• 2.10 CRP与Naive T/CD4+T细胞的共定位研究72-74
• 2.10.1 背景回顾72-73
• 2.10.2 研究思路与方法73
• 2.10.3 实验结果与分析73-74
• 2.11 CRP对EAE疾病的压制可能是通过对Th1/Th2直接调控完成的74-83
• 2.11.1 背景回顾74
• 2.11.2 研究思路与方法74-75
• 2.11.3 实验结果与分析75-83
• 第三章 结果与讨论83-89
• 3.1 课题研究成果83-84
• 3.2 课题结果讨论84-89
• 参考文献89-100
• 在学期间的研究成果100-101
• 致谢101

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 MA Xiao;JI Shang-Rong;WU Yi;;Regulated conformation changes in C-reactive protein orchestrate its role in atherogenesis[J];Chinese Science Bulletin;2013年14期

  本文关键词：C-反应蛋白通过对T细胞分化的直接调控参与后天免疫应答，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：440692