NF-κB信号通路介导的神经母细胞瘤增殖及侵袭、转移的实验研究
本文关键词：NF-κB信号通路介导的神经母细胞瘤增殖及侵袭、转移的实验研究，，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：第一部分NF-κB(p65),COX-2与MMP-9在神经母细胞瘤组织的表达及临床意义的研究目的探讨NF-κB(p65),COX-2与MMP-9在神经母细胞瘤组织的表达及临床意义。方法选取青岛大学附属医院石蜡包埋标本80例神经母细胞瘤组织和20例节细胞神经瘤组织病理切片标本,免疫组化检测神经母细胞瘤标本组织和节细胞神经瘤标本组织中NF-κB(p65),COX-2与MMP-9的表达,并比较年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤INSS分期、Shimada组织分型、淋巴结有无转移、有无侵润等与NF-κB,COX-2与MMP-9的表达的关系及NF-κB表达与COX-2与MMP-9的表达的关联性。结果NF-κB(p65),COX,MMP-9表达在神经母细胞瘤组织高表达,在节细胞神经瘤组织病理表达量较低,差异有统计学意义(P㩳0.01)。NF-κB(p65),COX-2,MMP-9表达均与患者肿瘤INSS分期、Shimada组织分型、淋巴结有无转移、有无侵润相关,而与患者年龄、性别、肿瘤大小无关,差异有统计学意义(P㩳0.01);NF-κB(p65)表达与COX-2,MMP-9表达相关性分析,我们发现NF-κB(p65),COX-2,MMP-9蛋白的表达呈明显正相关(R=0.626,P㩳0.01 AND R=0.612,P㩳0.01)。结论1.NF-κB(p65),COX-2,MMP-9蛋白在神经母细胞瘤均有阳性表达且高于节细胞神经瘤组织;2.NF-κB(p65),COX-2,MMP-9表达与患者肿瘤INSS分期、Shimada组织分型、淋巴结转移、有无侵润相关;3.NF-κB(p65)蛋白表达与COX-2,MMP-9蛋白表达呈明显的正相关。第二部分NF-κB信号通路在神经母细胞瘤增殖、侵袭及转移中的作用及机制探讨目的探讨NF-κB信号通路在神经母细胞瘤增殖、侵袭、转移中的作用及机制方法利用transwell检测并比较神经母细胞瘤细胞细胞QDDQ-NM1高转移及QDDQ-NM2低转移细胞系的不同侵袭能力,CCK-8检测两株细胞系增殖能力的不同,Western blort检测NF-κB(p65)和p-IκB表达的差异。用不同浓度(5、10、20、40μmol/L)NF-κB信号通路抑制剂PDTC预处理QDDQ-NM1高转移及QDDQ-NM2低转移细胞系,transwell检测观察两种细胞系侵袭能力变化,Real time PCR,Western blort检测不同浓度PDTC预处理QDDQ-NM1高转移及QDDQ-NM2低转移细胞系NF-κB(p65),p-IκB,IκB,COX-2,MMP-9表达的差异。选择神经母细胞瘤高转移细胞系QDDQ-NM1,TNF-α不同时间和浓度预处理QDDQ-NM1,促进NF-κB信号通路活化,Real time PCR及Western blort检测不同处理下NF-κB(p65),p-Ik Bα,IκB,COX-2,MMP-9基因表达变化,transwell检测细胞系侵袭能力变化。THP-1细胞系诱导产生巨噬细胞和SH-SY5Y细胞系共培养,模拟体内肿瘤微环境,Real time PCR及Western blort检测不同处理下NF-κB(p65),p-Ik Bα,COX-2,MMP-9基因表达变化。结果神经母细胞瘤细胞细胞QDDQ-NM1高转移细胞系增殖及侵袭能力高于QDDQ-NM2低转移细胞系且QDDQ-NM1中NF-κB(p65)和p-Ik Bα蛋白表达高于QDDQ-NM2(P0.01)。不同浓度NF-κB抑制剂PDTC预处理QDDQ-NM1高转移细胞系,随浓度增大QDDQ-NM1增殖能力和侵袭能力减弱,p-IκB蛋白表达逐渐减弱,COX-2,MMP-9蛋白表达也逐渐减弱(P0.01)。不同剂量或时间TNF-α预处理QDDQ-NM1细胞系,p-Ik Bα蛋白,MMP-9,COX-2蛋白表现出剂量和时间依赖性,不同处理组间细胞侵袭能力差异有统计学意义(P0.01)。PMA处理THP-1细胞系和SH-SY5Y细胞系共培养,共培养组与对照组或PDTC处理组相比,MMP-9,COX-2蛋白表达明显增加(P0.01)。结论1.NF-κB信号通路在神经母细胞瘤高转移侵袭细胞系活化增加;2.NF-κB的核转录启动下游基因COX-2和MMP-9的表达,增强神经母细胞瘤增殖、侵袭及转移能力;3.靶向阻断NF-κB信号通路可作为治疗和预防神经母细胞瘤增殖、侵袭及转移新途径。
【关键词】：NF-κB COX-2 MMP-9 神经母细胞瘤 NF-κB 侵袭 转移 神经母细胞瘤
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.4
【目录】：
- 摘要2-4
- Abstract4-10
- 第一部分NF-ΚB，COX-2 与MMP-9 在神经母细胞瘤组织的表达及临床意义10-37
- 引言10-13
- 参考文献12-13
- 1 材料与方法13-17
- 1.1 仪器、试剂和耗材13-14
- 1.2 方法14-16
- 1.3 统计学处理16-17
- 2 结果17-26
- 2.1 神经母细胞瘤组织与节细胞神经瘤组织HE染色鉴定17
- 2.2 NF-κB(p65)、COX-2 及MMP-9 在神经母细胞瘤及节细胞神经瘤的表达情况17-23
- 2.3 NF-κB(p65)、COX-2 及MMP-9 蛋白的表达与神经母细胞瘤临床病理特征关系23-24
- 2.4 NF-κB(p65)、COX-2 及MMP-9 蛋白表达的相关性24-26
- 3 讨论26-30
- 4 结论30-31
- 参考文献31-37
- 第二部分NF-ΚB信号通路在神经母细胞瘤增殖、侵袭及转移中的作用及机制探讨37-78
- 引言37-38
- 1 材料与方法38-50
- 1.1 仪器、试剂和耗材38-41
- 1.2 方法41-49
- 1.3 统计分析49-50
- 2 结果50-65
- 2.1 QDDQ-NM1与QDDQ-NM2细胞的体外侵袭能力比较50-51
- 2.2 QDDQ-NM1与QDDQ-NM2细胞的NF-κB活性比较51-52
- 2.3 CCK-8 测定不同浓度PDTC对QDDQ-NM1与QDDQ-NM2细胞的增殖作用52
- 2.4 不同浓度PDTC对QDDQ-NM1与QDDQ-NM2细胞体外侵袭能力的影响52-55
- 2.5 PDTC对神经母细胞瘤细胞系QDDQ-NM1中NF-κB和p-IκBα蛋白表达的影响55
- 2.6 PDTC对神经母细胞瘤细胞系中COX-2 和MMP-9 蛋白表达的影响55-56
- 2.7 PDTC对神经母细胞瘤细胞系中COX-2 和MMP-9 mRNA表达的影响56-57
- 2.8 CCK-8 测定不同浓度TNF-α对QDDQ-NM1与QDDQ-NM2细胞的增殖作用57-58
- 2.9 不同浓度TNF-α对QDDQ-NM1与QDDQ-NM2细胞体外侵袭能力的影响58-61
- 2.10 TNF-α对神经母细胞瘤高转移细胞系QDDQ-NM1中NF-κB,IκBα和p-IκBα蛋白表达影响61-62
- 2.11 TNF-α对神经母细胞瘤高转移细胞系QDDQ-NM1中MMP-9,COX-2 蛋白表达的影响62-63
- 2.12 TNF-α对神经母细胞瘤高转移细胞系QDDQ-NM1中COX-2 和MMP-9 mRNA表达的影响63-64
- 2.13 SH-SY5Y细胞与THP-1 细胞共培养实验64-65
- 3 讨论65-68
- 4 结论68-69
- 参考文献69-78
- 综述 NF-ΚB信号通路研究进展及与肿瘤的关系78-97
- 参考文献91-97
- 攻读学位期间的研究成果97-99
- 致谢99-100
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