何首乌对糖尿病的骨形态成分变化及BMP-2,TGF-β1,IGF-1的表达研究
发布时间：2017-07-31 05:15
本文关键词：何首乌对糖尿病的骨形态成分变化及BMP-2,TGF-β1,IGF-1的表达研究
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【摘要】：研究目的第一从临床观察何首乌汤剂对糖尿病性骨质疏松症患者的疗效分析。第二建立糖尿病性骨质疏松大鼠模型,从形态学、病理学、超微病理学、分子生物学四个层面观察糖尿病性大鼠骨的动态变化情况,了解何首乌对糖尿病性大鼠模型骨的形态及成分的影响。研究方法实验一:随机选取临床50例糖尿病性骨质疏松患者,分为2组(A组基础治疗组B组何首乌组)每组25例患者,对A组行基础治疗结合胰岛素控制血糖治疗,B组在基础治疗和胰岛素控制血糖的基础上加用何首乌口服治疗。分别在第0周、4周、8周、12周观察其血清钙(S-Ca)、血清磷(S-P)、碱性磷酸酶、骨钙素、骨密度变化及临床VAS、QOL、SF-MPQ、麻木评分。实验二:取100只大鼠,分空白对照组20只(A组)其余80只大鼠行STZ法8周后造成糖尿病性骨质疏松大鼠模型,选取成功成模大鼠60只随机分为3组:糖尿病组20只(B组)、胰岛素组20只(C组)、何首乌组20只(D组)。各组实验动物予以相应的干预后,分别于第0、8、12、16周检测:体重、血糖、糖化血红蛋白、血脂、骨密度、血清磷(S-P)、血清钙(S-Ca)、碱性磷酸酶、骨钙素;于第12、16周分批处死,检测HE染色、扫描电镜分析。实验三:于第12、16周观察糖尿病SD大鼠BMP-2、TGF-β1、IGF-Ⅰ在大鼠骨组织中的免疫组化及Westernblot表达情况,并用不同软件对数据进行统计学分析。研究结果实验一:1、两组患者治疗前后VAS评分比较:B组(何首乌治疗组)患者治疗后VAS评分12周比治疗前0周及4周明显升高(P0.05);组间相比,b组(何首乌治疗组)在治疗后12周的vas评分较a组(基础治疗组)明显升高(p0.05)。2、两组患者治疗前后qol评分比较:b组(何首乌治疗组)患者治疗后12周qol评分均较治疗前0周和4周明显升高(p0.05),a组(基础治疗组)qol评分12周比0周差异有统计学意义(p0.05);组间相比,b组(何首乌治疗组)在治疗后12周的qol评分较a组(基础治疗组)明显升高(p0.05)。3、两组患者治疗前后sf-mpq评分比较:b组(何首乌治疗组)患者8周和12周与0周和4周相比sf-mpq评分均显著降低,差异均具明显统计学差异(p0.05),a组(基础治疗组)患者12周sf-mpq评分与0周相比和12周相比差异有统计学意义(p0.05);而组间比较,b组(何首乌治疗组)与a组(基础治疗组)相比较,sf-mpq评分在12周后具有统计学差异(p0.05),说明b组治疗对疼痛改善程度要优于a组。4、两组患者在治疗前后末梢皮肤麻木的情况比较:b组(何首乌治疗组)患者8周、12周麻木程度与0周、4周相比均有显著性差异(p0.05),a组(基础治疗组)患者12周麻木程度与0周相比和4周相比差异有统计学意义(p0.05);两组间比较,b组(何首乌治疗组)在治疗后12周的麻木评分较a组(基础治疗组)有显著性(po.05)。5、两组疾病疗效比较:两组治疗后12周疾病疗效比较,基础治疗组25例,显效5例(20.00%),有效11例(44.00%),无效9例(36.00%),总有效率64.00%。何首乌治疗组25例,显效8例(32.00%),有效13例(52.00%),无效4例(16.00%),总有效率84.00%。治疗总有效率优于对照组,有统计学意义(p0.01)。6、糖化血红蛋白测定结果:第8、12周糖化血红蛋白测定结果显示b组(何首乌组)中患者与0周和4周相比有统计学意义(p㩳0.05),在第12周a组(基础治疗组)中患者与0周相比有统计学意义(p㩳0.05);其余各组无明显统计学意义。7、治疗前后两组血钙,磷变化及钙磷乘积变化:两组患者血钙在治疗前均在正常范围。两组患者血钙在治疗前及治疗后均正常,差异亦无统计学意义(p0.05);两组患者血磷在治疗前及治疗后均正常,差异亦无统计学意义(p0.05);钙磷乘积:差异亦无统计学意义(p0.05)。8、血清akp(碱性磷酸酶):b组血清akp(碱性磷酸酶)含量在第12周和8周与0周相比,差异有统计学意义(p0.05)。a组血清akp(碱性磷酸酶)在第12周与0周相比,差异有统计学意义(p0.05)。其余各组无统计学意义。9、血清bgp(骨钙素):b组血清bgp含量在第12周和8周与0周相比,差异有统计学意义p0.05。a组血清bgp含量在第12周与0周相比,差异有统计学意义p0.05。其余各组无统计学意义。10、骨密度测定:差异无统计学意义(p0.05)。实验二:1、一般情况1.1平均体重测量:在第16周糖尿病组b组与空白对照组a组、胰岛素组c组、何首乌组d组相比,差异有统计学意义(p0.05)。1.2血糖测量,在第8周糖尿病组(b组)、胰岛素组(c组)、何首乌组(d组)与空白对照组(a组)相比较,差异有统计学意义(p0.05)。在第12、16周糖尿病组(b组)与空白对照组(a组)、胰岛素组(c组)、何首乌组(d组)相比较,差异有统计学意义(p0.05)。1.3糖化血红蛋白测定:第16周糖尿病组(b组)与空白对照组(a组)和何首乌组(d组)相比,差异有统计学意义(p0.05)。组内比较糖尿病组(b组)第16周与0周相比,差异有统计学意义(p0.05)。2、血脂代谢情况测定血清总胆固醇、甘油三脂、hdl-c和ldl第8周空白对照组与胰岛素组、何首乌组、糖尿病组比较,差异有统计学意义p0.05;第12周空白对照组、何首乌组与糖尿病组比较,差异有统计学意义p0.05。第16周空白对照组、胰岛素组、何首乌组与糖尿病组比较,差异有统计学意义p0.05。糖尿病组第16周与0周相比,差异有统计学意义p0.05。3、相关生化指标检测血清ca含量:第16周糖尿病组(b组)与胰岛素组(c组)、空白对照组(a组)和何首乌组(d组)比较,差异有统计学意义(p0.05);组间比较,糖尿病组(b组)第16周与0周比较,差异有统计学意义(p0.05)。血清p含量:在各个时间段组间和组内相比较均无明显统计学意义(p0.05)。钙磷乘积:第16周糖尿病组与与空白对照组(a组)和何首乌组(d组)比较均降低有统计学意义(p0.05);而组间比较钙磷乘积糖尿病组第16周较第0周降低有统计学意义(p0.05),其余各组间在各个时间段比较均无统计学意义(p0.05)。血akp(碱性磷酸酶)含量变化:第8周空白对照组(a组)与糖尿病组(b组)、胰岛素组(c组)和何首乌组(d组)比较,差异有统计学意义(p0.05)。而第16周糖尿病组(b组)与胰岛素组(c组)、空白对照组(a组)和何首乌组(d组)比较,差异有统计学意义(p0.05)。糖尿病组(b组)第16周和12周与0周比较,差异有统计学意义(p0.05)血清bgp(骨钙素)含量变化:第8周空白对照组(a组)与糖尿病组(b组)、胰岛素组(c组)和何首乌组(d组)比较,差异有统计学意义(p0.05)。而第16周糖尿病组(b组)与胰岛素组(c组)、空白对照组(a组)和何首乌组(d组)比较,差异有统计学意义(p0.05)。糖尿病组(b组)、胰岛素组(c组)和何首乌组(d组)第8周与0周比较,差异有统计学意义(p0.05),糖尿病组(b组)第16周与0周比较,差异有统计学意义(p0.05)。4、双能x线:腰椎、髋部骨密度测定,第8周空白对照组(a组)与糖尿病组(b组)、胰岛素组(c组)和何首乌组(d组)比较,差异有统计学意义(p0.05)。糖尿病组(b组)第16周与0周比较,差异有统计学意义(p0.05)。第16周糖尿病组(b组)与胰岛素组(c组)、空白对照组(a组)和何首乌组(d组)比较,差异有统计学意义(p0.05)。糖尿病组(b组)、胰岛素组(c组)和何首乌组(d组)第8周与0周比较,差异有统计学意义(p0.05)。5、骨组织光镜观察:空白对照组:第12、16周:骨小梁均匀,骨细胞清晰,骨陷窝正常,骨细胞核规则,核排列靠陷窝中间(中央型)。糖尿病组第12周:骨细胞减少,可见骨细胞核固缩,骨小梁变细,排列稍紊乱,骨细胞核不规则,可见三角形、杆状、弯月行,核排列靠陷窝边缘(周围型)。第16周:骨细胞进一步减少,部分骨细胞核固缩,骨小梁变细,排列紊乱,骨细胞核不规则,有三角形、杆状、弯月行,核排列靠陷窝边缘(周围型)。胰岛素组第12周:骨细胞减少,骨细胞部分核固缩,较多空骨陷窝,周围的鞘增厚,骨小管减少且短,骨小梁稍变细,排列紊乱,骨细胞核不规则,有三角形、杆状、弯月行,核排列靠陷窝边缘(周围型);第16周与空白对照组16周相似。何首乌组第12周:骨小梁均匀粗细相等,排列规则,骨细胞较清晰,骨陷窝数量正常,骨细胞核规则,核排列靠陷窝中间(中央型);何首乌组:第16周同空白对照组16周。6、电镜观察:空白对照组:第12周16周股骨颈的骨小梁均匀粗细相等,排列非常规则,骨小梁之间的间隙很小,表面光滑。糖尿病组:第12周大鼠股骨颈的骨密质较薄,骨小梁排列不规则且变细,骨小梁互相连接成疏松的立体网状结构有增多,较大的骨小梁之间的间隙,表面稍粗糙。第16周骨小梁表面的胶原纤维排列杂乱、松散,空骨陷窝数量逐渐增加,空骨陷窝周围的鞘增厚,骨小管变短且数量减少,表面粗糙。胰岛素治疗组与何首乌治疗组:第12周大鼠股骨颈的骨密质较薄,骨小梁排列不规则骨小梁互相连接成疏松的立体网状结构有增多,稍大的骨小梁之间的间隙,表面稍粗糙。胰岛素治疗组第16周大鼠股骨颈的骨密质变厚,骨小梁基本均匀粗细大致相等,排列基本规则,骨小梁的立体网状结构有增加,较大的骨小梁之间的间隙,表面较光滑。何首乌治疗组第16周与空白对照组相似。实验三：免疫组化和免疫印迹法实验结果显示糖尿病组16周BMP-2、TGF-β1、IGF-Ⅰ含量明显低于其余各组有统计学意义(P0.05);第12周空白对照组与其余3组相比有统计学意义(P0.05);何首乌组BMP-2、TGF-β1、IGF-Ⅰ含量16周与12周相比升高,差异明显有统计学意义(P0.O5)。结论1、何首乌治疗糖尿病性骨质疏松患者,可以改善患者的临床症状。2、何首乌对于糖尿病性骨质疏松症患者,可以使糖化血红蛋白稳定,BGP和AKP血中含量下降,并且没有明显副作用。3、何首乌对DOP大鼠模型可以改善血糖、糖化血红蛋白4、何首乌对DOP大鼠模型可以血钙恢复正常,稳定AKP、BGP,使骨密度增加。5、何首乌可以改善DOP大鼠模型紊乱的血脂。6、糖尿病大鼠随着时间延长BMP-2、IGF-Ⅰ、TGF-β1的在骨中含量会下降。7、何首乌和胰岛素均可以改善糖尿病大鼠的骨质中BMP-2、IGF-Ⅰ、TGF-β1的含量,促进骨形成,但何首乌结合胰岛素治疗的效果优于单纯胰岛素治疗。
【关键词】：何首乌 糖尿病大鼠 动物模型 糖尿病性骨质疏松 骨形态发生蛋白-2 转化生长因子-β1 胰岛素样生长因子-1
【学位授予单位】：湖北中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285
【目录】：
- 中文摘要4-10
- Abstract10-20
- 中英文缩略词表20-22
- 前言22-25
- 实验研究25-102
- 实验一：何首乌治疗糖尿病性骨质疏松症患者的临床研究25-41
- 一、研究目的及方法26-30
- 二、结 果30-36
- 三、讨 论36-40
- 四、结论40-41
- 实验二：何首乌对糖尿病性骨质疏松大鼠模型骨形态及成分变化的实验研究41-80
- 一、材料和方法42-50
- 二、结果50-68
- 三、讨论68-79
- 四、结论79-80
- 实验三: 何首乌对糖尿病性骨质疏松大鼠模型骨的BMP-2、TGF-Β1、IGF-Ⅰ的表达研究80-102
- 一、材料和方法81-84
- 二、结 果84-96
- 三、讨 论96-102
- 四、结 论102
- 参考文献102-113
- 综述一113-123
- 参考文献119-123
- 综述二123-133
- 参考文献129-133
- 攻读学位期间发表论文133-135
- 致谢135
本文编号：597616
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/yxlbs/597616.html
教材专著
