5-羟色胺与机体痛觉相关性研究

发布时间：2017-08-21 20:32

  本文关键词：5-羟色胺与机体痛觉相关性研究

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【摘要】：疼痛是临床工作中最为常见的一种症状,常常给患者带来了极大的痛苦。伤害性损伤是导致疼痛发生的主要原因,外周神经损伤以及组织损伤均可导致发生疼痛。研究显示,疼痛的发生机制主要分为以下两种：一为外周伤害性的信息不断传入；二为机体脊髓内的感觉神经元兴奋性出现变化。5-羟色胺(5-HT)在机体的中枢神经以及外周神经系统当中均匀分布。在外周神经系统中,5-HT主要的来源为肥大细胞以及血小板。根据对拮抗剂、特异激动剂选择性的不同,将5-HT的受体分为以下7种类型,即5-HT1、5-HT2、5-HT3、5-HT4、 5-HT5、5-HT6以及5-HT7受体,同时根据这7中亚型的分子结构以及其亚基的不同,又可将其细分为14种不同的亚型。根据目前研究显示5-羟色胺、5-羟色胺受体以及5-羟色胺转运体均与病理性神经痛有着密切的关系。对疼痛的感受因人而异,很多因素都会影响人对伤害性刺激的感受。以往的痛感诱导实验结果表明,遗传学因素可占到25～60%不等。此外,也有研究表明,遗传学因素也与长期持续性疼痛状况的发生、发展有关。本实验分为总体分为两大部分：一、5-HTT (5-Hydroxytryptamine transporter) SS基因型与乙醇刺激造成的促伤害性感知相关研究；二、延胡索乙素对福尔马林致痛大鼠L4-L5段脊髓灰质后角内5-HT以及相关受体和转运体表达变化的影响。第—部分：本研究的目的在于探索5-HTT基因型与医用酒精消毒时刺痛的敏感性之间的关系。作者首次从临床的角度研究编码5-羟色胺转运体(5-HTT)的基因SLC6A4的启动子上基因多态性与伤害性刺激敏感度之间的关系。217位在小腿外侧区域轻度皮肤擦伤的门诊患者被招募进入本研究,所有的血液样本通过聚合酶链扩增(PCR)及酶切技术进行了基因分型。招募对象对医用酒精处理后的痛感强度采用视觉模拟评分法(VAS)来进行评价。第二部分：通过足底注射福尔马林的方法建立福尔马林足底疼大鼠模型,并对其进行行为学观察,以缩腿及舔爪时间之和作为行为学的反应指标,以及L4-L5腰段脊髓灰质后角内c-Fos蛋白表达的测定来判断福尔马林致痛模型是否成功。接着通过免疫组织化学的方法对L4-L5腰段脊髓灰质后角内5-HT、5-HTT、5-H2A受体观察,同时利用westernblot的方法测定了上述几种物质的表达量在由福尔马林足底致痛过程中疼痛感觉之间的关系,通过不同时间段对c-Fos蛋白、5-HT、5-H2A受体、5-HTT这四者的表达测定,探索了c-Fos蛋白、5-HT、5-H2A受体、5-HTT这四者与时间变化关系。实验结果第一部分：1.5-HTT基因型组的分布通过对217位受试者基因型的测定,发现有61位受试者被确定为5-HTT低表达,其中男性占36.06%,女性占63.93%；86位受试者5-HTT中等表达,男性占18.60%,女性占81.40%；70位受试者5-HTT高表达,男性占32.86%,女性占67.14%。高、中、低表达人员分别占总受试者人数的28.11%、39.63%和32.25%。2.VAS评分的基线标准化灭菌生理盐水处理被用作VAS评分的基线。尽管5-HTT低表达组的VAS平均得分高于其它两个组,但均无显著的统计学差异(p0.05)。实验结果显示,采用灭菌生理盐水处理对各组的VAS基线均无明显的影响。此外,性别间也未观察到明显差异。3.依赖于5-HTT基因型的敏感性基于标准化的VAS评分基线,3种5-HTT基因型分组对乙醇刺激痛的敏感性的VAS评分有显著的差异。与5-HTT高表达和中等表达组相比,编码5-HTT低表达基因型组的受试者对乙醇的刺激痛表现出了较强的反应,而在5-HTT高表达和中等表达组之间无显著统计学差异。在每组中,性别间差异未有体现。第二部分1.延胡索乙素对福尔马林足底致痛大鼠行为学的影响通过实验发现,大鼠足底注射福尔马林之后所产生的行为学反应主要是明显的缩腿舔爪反应。即注射福尔马林侧足出现卷曲缩退和用舌舔患部的舔爪反应。动物的这种反应在注射福尔马林后的第一个5min内大鼠开始有舔爪反应,而且非常明显,但在第二个5min内舔爪反应明显下降,而之后的第三个5min开始大鼠舔爪反应不断直至结束。另外,与福尔马林模型组相比布洛芬组大鼠与延胡索乙素组(大、中、小)大鼠的舔爪缩腿时间明显减少(P0.05,n=6)；2.福尔马林足底致痛大鼠脊髓后角c-Fos蛋白、5-HT、5-HT2A受体以及5-HTT表达随时间变化大鼠给予足底注射福尔马林后30、60、90main时L4-L5腰段脊髓灰质后角均有c-Fos蛋白、5-HT、5-HT2A受体以及5-HTT的表达,且均在60min时,表达最明显。3.延胡索乙素对福尔马林足底致痛大鼠脊髓后角c-Fos蛋白表达影响大鼠足底注射福尔马林后60min时,模型组大鼠L4-L5腰段脊髓灰质后角内c-Fos表达量明显高于正常组大鼠(P0.05,n=6)；而布洛芬组大鼠以及延胡索乙素组(大、中、小)大鼠的c-Fos表达量明显低于模型组(P0.05,n=6)。4.延胡索乙素对福尔马林足底致痛大鼠脊髓后角5-HT表达影响注射福尔马林后60min后,模型组大鼠L4-L5腰段脊髓灰质后角内5-HT表达量明显增加,与正常组大鼠相比差异显著(P0.05,11=6)；而布洛芬组大鼠以及延胡索乙素组(大、中、小)大鼠的5-HT表达量明显低于模型组(P0.05,n=6)。5.延胡索乙素对福尔马林足底致痛大鼠脊髓后角5-HT2A受体表达影响福尔马林注射后60min时,模型组大鼠L4-L5腰段脊髓灰质后角内5-HT2A受体表达量比正常组大鼠明显增高(P0.05,n=6)；而布洛芬组大鼠以及延胡索乙素组(大、中、小)大鼠的表达量则明显低于模型组(P0.05,n=6)。6.延胡索乙素对福尔马林足底致痛大鼠脊髓后角5-HTT表达影响足底注射福尔马林制备明显60min后,模型组L4-L5脊髓灰质后角内5HT表达量明显高于正常组大鼠(P0.05,n=6)；而布洛芬组大鼠以及延胡索乙素组(大、中、小)表达量明显低于模型组(P0.05,n=6)。结论1.机体的疼痛感觉敏感性与5-HTT的相关基因存在一定的关联；2.福尔马林止痛模型诱导的L4-L5脊髓灰质后角内c-Fos、5-HT、5-HT2A受体以及5-HT转运体的表达存在时间段表达性差异,在60min时达到表达高峰；3.c-Fos、5-HT、5-HT2A受体以及5-HT转运体的表达参与了由福尔马林诱导的机体疼痛感觉过程；4.延胡索乙素对由福尔马林引起的疼痛效应具有一定的抑制作用且中、高剂量的延胡索乙素的抑制作用比布洛芬的效果更加显著,该作用可能是通过调节5-HT以及其相关受体和转运体来实现。
【关键词】：福尔马林疼痛模型 五羟色胺 五羟色胺受体 五羟色胺转运体 基因型 c-Fos蛋白
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R402
【目录】：

• 摘要9-13
• ABSTRACT13-18
• 英文缩写词表18-19
• 第一章 前言19-22
• 第二章 材料与方法22-31
• 2.1 5-HTT SS基因型与乙醇刺激造成的促伤害性感知相关研究22-24
• 2.1.1 实验方法22-24
• 2.1.1.1 受试对象22
• 2.1.1.2 疼痛评分22
• 2.1.1.3 实验仪器与试剂22-23
• 2.1.1.4 基因分型23
• 2.1.1.5 统计学分析23-24
• 2.2 延胡索乙素对福尔马林致痛大鼠L4-L5段脊髓灰质后角内5-HT以及相关受体和转运体表达变化的影响24-31
• 2.2.1 实验材料24-27
• 2.2.1.1 实验动物24
• 2.2.1.2 实验仪器24-25
• 2.2.1.3 药品25-26
• 2.2.1.4 实验药物配制26-27
• 2.2.2 实验方法27-31
• 2.2.2.1 实验分组27
• 2.2.2.2 福尔马林足底致痛模型制备27
• 2.2.2.3 行为学指标观察27
• 2.2.2.4 免疫组织化学染色法27-29
• 2.2.2.4.1 L4-L5腰段脊髓组织的固定、取材、切片28
• 2.2.2.4.2 免疫组织化学染色28-29
• 2.2.2.5 Western blotting(蛋白质的免疫印迹分析)29-30
• 2.2.2.6 统计学处理30-31
• 第三章 实验结果31-48
• 3.1 5-HTT SS基因型与乙醇刺激造成的促伤害性感知相关研究31-34
• 3.1.1 5-HTT基因型组的分布31-32
• 3.1.2 VAS评分的基线标准化32-33
• 3.1.3 依赖于5-HTT基因型的敏感性33-34
• 3.2 延胡索乙素对福尔马林致痛大鼠L4-L5段脊髓灰质后角内5-HT以及相关受体和转运体表达变化的影响34-48
• 3.2.1 延胡索乙素对福尔马林足底致痛大鼠行为学的影响34-35
• 3.2.2 福尔马林足底痛对大鼠脊髓后角C-FOS、5-HT、5-H2A、5-HTT表达的影响35-40
• 3.2.2.1 福尔马林足底致痛大鼠脊髓后角C-FOS蛋白表达随时间变化35-36
• 3.2.2.2 福尔马林足底致痛大鼠脊髓后角5-HT表达随时间变化36-37
• 3.2.2.3 福尔马林足底致痛大鼠脊髓后角5-H2A受体表达随时间变化37-39
• 3.2.2.4 福尔马林足底致痛大鼠脊髓后角5-HTT表达随时间变化39-40
• 3.2.3 延胡索乙素对福尔马林足底致痛大鼠脊髓后角C-FOS、5-HT、5-H2A、5-HTT表达的影响40-48
• 3.2.3.1 延胡索乙素对福尔马林足底致痛大鼠脊髓后角C-FOS蛋白表达影响41-42
• 3.2.3.2 延胡索乙素对福尔马林足底致痛大鼠脊髓后角5-HT表达影响42-44
• 3.2.3.3 延胡索乙素对福尔马林足底致痛大鼠脊髓后角5-H2A受体表达影响44-45
• 3.2.3.4 延胡索乙素对福尔马林足底致痛大鼠脊髓后角5-HTT表达影响45-48
• 第四章 讨论48-54
• 4.1 5-HTT SS基因型与乙醇刺激造成的促伤害性感知相关研究48-50
• 4.2 延胡索乙素对福尔马林致痛大鼠L4-L5段脊髓灰质后角内5-HT以及相关受体和转运体表达变化的影响50-54
• 第五章 结论54-55
• 参考文献55-61
• 文献综述61-95
• 参考文献82-95
• 攻读学位期间发表的论文95-96
• 致谢96

【参考文献】

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