辅助生殖技术中提高胚胎移植效率的相关研究

发布时间：2017-08-22 01:32

  本文关键词：辅助生殖技术中提高胚胎移植效率的相关研究

  更多相关文章： 选择性单囊胚移植 卵裂期双胚移植 冻融胚胎移植 多胎妊娠 囊胚培养 性别比 体外受精-胚胎移植 卵裂球固定 荧光原位杂交 胚胎评分

【摘要】：第一部分不同移植方案对胚胎移植效率的影响分析目的：体外受精-胚胎移植过程中,在促排卵后,针对正常卵巢反应患者和卵巢高反应患者(获卵数15个),分析选择采用何种移植方案既能获得理想的临床妊娠率,又能有效减少并发症和多胎妊娠的发生。方法：将采用长方案进行超促排卵的患者纳入研究对象。纳入标准包括：原发不孕、女方年龄≤35岁,取卵后第三天(D3)优胚数≥6枚。根据获卵数将患者分为两类：一类是正常卵巢反应患者(获卵数6～15个)；另一类是卵巢高反应患者(获卵数大于15个)。从胚胎培养室的角度将移植方案设定为三种：第一种为新鲜周期D3卵裂期双胚移植,第二种为选择新鲜周期取卵后第五天(D5)单囊胚移植；第三种为新鲜周期不移植,行冷冻囊胚复苏后移植的患者。根据临床结局,回顾性分析不同胚胎移植方案对临床结局的影响。结果：1)对于卵巢正常反应患者,D3天卵裂期双胚胎移植与D5天选择性单囊胚移植具有相似的临床妊娠率(64.04% vs.60.33%,p0.05),但单囊胚移植的多胎率极其显著的低于D3双胚胎移植(4.11% vs.35.62%,p0.01)。2)采用D5单囊胚移植,卵巢高反应患者的临床妊娠率明显低于卵巢正常反应患者(43.35%vs.60.33%,p0.05)。3)对于卵巢高反应患者,采用冷冻囊胚移植比新鲜周期囊胚移植可获得更高的临床妊娠率和着床率(60.60% vs.43.35%和60.60% vs.43.35%,p0.05)。结论：对于卵巢正常反应患者,新鲜周期选择性单囊胚移植既能保证临床妊娠率又能有效降低多胎妊娠的发生。而对于卵巢高反应患者,建议采用冻胚移植方案提高妊娠率。第二部分体外受精-胚胎移植过程中囊胚培养对胚胎性别偏离的影响目的：探讨体外受精-胚胎移植过程中常规囊胚培养对新鲜囊胚移植周期(D5胚胎)性别出生比例偏离的影响及发生这种偏离的可能原因。方法：选择2013年3月至2014年8月在山东大学附属生殖医院行体外受精-胚胎移植技术的患者,将符合移植标准或冷冻标准的胚胎均进行移植或冷冻,将剩余的放弃并捐献科研的胚胎根据不同的类型进行单个胚胎收集,并通过PCR进行胚胎的性染色体特异序列检测。与国内多中心辅助生殖技术出生婴儿的结局以及本中心2012和2013年进行冷冻复苏周期囊胚移植后出生婴儿的结局进行对比。另外采用微滴式数字PCR技术检测IVF (In vitro fertilization)患者精子样本处理前后X精子和Y精子比例,并进行对比分析。结果：1)IVF/ICSI过程中,对准备授精预处理前的精子和处理后的精子,行Y/X比例检测发现处理后的Y精子与X精子的比例显著的低于男性外周血淋巴细胞性染色体特异序列检测基准比值(0.68：1 vs.0.83：1,P0.01)(理论数值应为1：1；0.83：1是鉴于微滴式数字PCR的系统误差校正后的比值,同一仪器对精子DNA的检测以此为参照),也低于处理前的Y精子与X精子的比例(0.68：1 vs.0.76:1, P0.01)。2) IVF周期剩余胚胎的男性比率52.94%；ICSI(Intracytoplasmic sperm injection)周期剩余胚胎的男性比率为47.59%,与多中心的生产结局相比均没有显著性差异(多中心IVF后男性比率为52.33%,；ICSI后男性比率为49.73%),说明选择剩余胚胎作为实验对象对后续分析无明显影响,且ICSI人工操作未造成男性比例增加。3)冷冻囊胚(D5-D6)移植与新鲜周期D3胚胎移植相比,生产结局的男性比例之间没有显著性差异(52.33% vs.53.70%,P0.05)。冷冻囊胚移植与新鲜周期卵裂期胚胎移植相比没有产生明显的性别偏移,说明囊胚培养后形成囊胚的整体性别无明显偏移,文献报道的新鲜囊胚移植后性别发生偏移需要从胚胎选择时间等其他方面进行研究。结论：采用囊胚培养技术本身并没有导致男性胚胎更易发育成囊胚,因此不会导致整体囊胚性别比例的改变。文献报道新鲜周期囊胚移植后婴儿出生比例向男性偏移需要从新鲜囊胚的挑选时机等方面探讨原因。IVF周期胚胎及出生婴儿性别比较ICSI周期存在向男性偏移的倾向,但导致该趋势的原因不来自于授精时Y精子的数量比例。第三部分改良的胚胎卵裂球固定方法对荧光原位杂交过程中固定率和探针杂交效果的影响目的：荧光原位杂交(Fluorescent in situ hybridization, FISH)技术用于胚胎植入前遗传学诊断,其有效性很大程度取决于卵裂球或滋养层细胞的固定率和探针杂交效果。卵裂球细胞的固定率取决多个方面的因素,论文该部分的研究主要目的是评价改良的固定方法对固定率和探针杂交效果的影响,同时分析胚胎质量与FISH结果的相关性。方法：采用tween20+甲醇冰醋酸作为卵裂球固定液,在传统固定流程的基础上,对固定液使用的时机及方式做了改良。采用传统的固定方法和本课题组改良的固定方法分别对2012年2月至2015年1月在山东大学附属生殖医院用FISH技术行胚胎植入前遗传学诊断的患者进行胚胎的卵裂球固定操作。同时根据胚胎的质量评分进行分类、统计和分析。按照形态学评分将胚胎分为优质胚胎(形态学评分≥3分)与非优质胚胎(形态学评分为2分以下),在用常规的卵裂球固定方法和改进的卵裂球固定方法时,对不同评分级别的胚胎所来源的卵裂球的最终固定率、信号率及完全信号率进行对比。结果：本课题组共纳入研究的胚胎2939枚。1)与常规固定方法相比,用改进的卵裂球固定方法后,改进组与常规组的固定率之间没有显著性差异(92.02%vs.91.17%,p=0.4377),但改进组的信号检出率要显著的高于常规组(99.02%vs.85.16%,p0.001),改进组的每种探针完全信号率(去除理论上完全不可能出现的零探针信号)也显著的高于常规组(91.79%vs.77.80%,p0.001)。2)用常规的卵裂球固定方法进行卵裂球固定,优质胚胎的固定率/核扩展率要明显的高于非优质胚胎(92.52%VS.87.62%,p=0.0007)；完全信号率亦明显高于非优质胚胎(79.32%VS.65.05%,p0.001)；两组之间的出信号率没有显著的差别(85.60 vs.83.94%,p=0.3855)。3)用改进的卵裂球固定方法后,优质胚胎卵裂球的固定率显著高于非优质胚胎卵裂球的固定率(93.61%VS.87.90%,p=0.0027)；信号检出率和完全信号率方面,优质胚胎与非优质胚胎组之间没有显著性差异(99.56%vs.97.57%,P=0.0066；91.96%vs.91.29%,P=0.7432)。结论：采用改良的固定方法可有效改善卵裂球固定后探针杂交效果,利于结果判读和减少误诊；无论采用改良或常规的固定方法优质胚胎的固定率均明显的高于非优质胚胎,提示我们在患者胚胎足够多的情况下,可以通过胚胎评分进行初筛从而降低检测成本,减少患者花费。
【关键词】：选择性单囊胚移植 卵裂期双胚移植 冻融胚胎移植 多胎妊娠 囊胚培养 性别比 体外受精-胚胎移植 卵裂球固定 荧光原位杂交 胚胎评分
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R714.8
【目录】：

• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-14
• 符号说明14-16
• 序言16-23
• 第一部分 不同移植方案对胚胎移植效率的影响分析23-39
• 前言23-24
• 资料与方法24-36
• 结果36-37
• 讨论37-39
• 第二部分 体外受精-胚胎移植过程中囊胚培养对胚胎性别偏离的影响39-51
• 前言39-40
• 资料与方法40-47
• 结果47-48
• 讨论48-51
• 第三部分 改良的胚胎卵裂球固定方法对荧光原位杂交过程中固定率和探针杂交效果的影响51-62
• 前言51-52
• 资料与方法52-58
• 结果58-59
• 讨论59-62
• 附图表62-72
• 参考文献72-83
• 致谢83-84
• 攻读硕士期间发表的论文84-86
• 附英文原文86-116
• 附件116

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 李刚;孙莹璞;金海霞;;植入前遗传学诊断中四种卵裂球固定方法的比较[J];生殖与避孕;2006年07期

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本文编号：716332