牛蒡子质量评价及炮制过程化学成分变化规律研究

发布时间：2017-08-23 20:32

本文关键词：牛蒡子质量评价及炮制过程化学成分变化规律研究

【摘要】：牛蒡子是一味临床常用的中药,主要产于吉林、辽宁、黑龙江、浙江等地区。目前,牛蒡子药材及饮片的质量控制主要以木脂素类成分牛蒡苷和牛蒡苷元的含量为指标,忽视了牛蒡子中具有重要药理活性的酚酸类成分,如绿原酸、异绿原酸A等。因此,研究建立牛蒡子多指标质量评价方法,采用多指标成分进行质量控制具有重要的意义。牛蒡子常炒制后使用,目前不同地方炮制规范中牛蒡子的炮制工艺尚不够规范统一,存在微炒、炒黄和炒焦等几种炮制工艺,炒制程度也有显著差异。牛蒡子炮制前后化学成分发生了复杂的变化,这些成分是如何变化的?其变化过程和变化规律是什么?还有待进一步研究阐明。基于上述问题,本文对牛蒡子质量评价方法和炮制过程化学成分变化规律进行了系统研究,建立了牛蒡子质量评价方法,并阐明了牛蒡子炮制过程主要成分的变化规律。本文在前期化学成分研究的基础上,首先以牛蒡子中绿原酸、异绿原酸A、牛蒡苷和牛蒡苷元等4个主要成分为质量评价指标,采用正交试验法和响应面法两种方法优选牛蒡子超声提取工艺。结果显示,不同工艺优选方法确定的工艺条件相近。为了进一步比较超声提取工艺和回流提取工艺的提取效果,本文又采用正交实验法,对牛蒡子的回流提取工艺进行研究,建立了牛蒡子最佳回流提取工艺。结果发现,在回流提取和超声提取过程中,粉碎粒度都是影响牛蒡子成分溶出的最重要因素,这说明牛蒡子在临床使用过程中需破碎后使用具有一定的科学内涵,符合古代炮制文献和现代中药饮片炮制规范对牛蒡子炮制后“用时捣碎”的要求。在牛蒡子提取工艺研究的基础上,本文对不同产地牛蒡子进行质量评价研究,建立不同产地牛蒡子的定性定量评价方法。在定量分析研究中,采用HPLC法测定不同产地牛蒡子中牛蒡苷等4个主要成分的含量,通过对20批次样品的测定结果进行分析,暂定牛蒡子中4个主要成分的质量控制标准为：绿原酸：1.50mg/g、异绿原酸A：1.00mg/g、牛蒡苷：50.Omg/g、牛蒡苷元：5.00mg/g。采用指纹图谱技术联合化学计量学方法,对不同产地牛蒡子进行定性分析。研究结果显示,指纹图谱技术结合化学计量学方法可以有效的评价牛蒡子内在质量,并且质量相似的聚在一起,为牛蒡子饮片的整体质量评价提供全面、客观和准确的依据。本文采用定性分析和定量分析相结合的方法,对牛蒡子炮制前后进行分析。在定量分析中,通过15批牛蒡子样品分析显示,牛蒡子炮制后绿原酸、异绿原酸A和牛蒡苷的含量降低,牛蒡苷元的含量升高。采用指纹图谱技术结合化学计量学方法对炮制前后样品进行定性分析后发现,牛蒡子炮制前后整体质量发生显著差异,在聚类分析和主成分分析中,炮制前后牛蒡子均可单独聚为一类,含量不合格样品可以被准确识别。由此可见,该方法可以准确的对牛蒡子生品及炮制品进行质量评价。在此基础上,对牛蒡子炮制前后水煎液样品中的主要成分进行含量分析,结果显示,炮制后的水煎液中牛蒡苷的含量呈下降趋势。绿原酸和异绿原酸A的含量也明显降低,只有牛蒡苷元含量升高,且4个成分的总量下降。因此,传统炮制理论认为牛蒡子炮制机理为“促进有效成分溶出”的解释值得商榷。采用UPLC-QTOF-MS技术对牛蒡子炮制前后的化学成分进行了系统的研究,发现牛蒡子炮制前后化学成分发生复杂的变化,生品中检测到18个成分,炮制品中检测到21个成分,炮制过程中可能发生了成分分解、转化反应。在炮制前后变化研究的基础上,本文对牛蒡子炮制过程中7个成分的含量变化进行过程分析。结果显示,牛蒡子炮制过程中牛蒡苷的含量先略升高,后因受热分解而含量降低,牛蒡苷元的含量升高,推测在炮制过程中牛蒡苷受热分解生成牛蒡苷元。绿原酸和异绿原酸A含量均明显下降,而咖啡酸的含量显著升高,推测在炮制过程中,这两个成分受热分解产生咖啡酸。因此,牛蒡子炮制过程中应严格控制炮制工艺,考虑到牛蒡苷元和咖啡酸具有显著的药理活性,在系统的比较研究的基础上,建议牛蒡子在炮制过程中应控制药材温度在160℃左右,炒制时间在5-10min。为了进一步验证牛蒡子炮制过程中主要成分的变化规律,本文对牛蒡子中绿原酸、异绿原酸A、牛蒡苷和牛蒡苷元等4个主要成分单独受热和混合受热过程进行研究。结果显示,上述4个成分混合加热,可以提高分解效率。说明牛蒡子炮制过程中化学成分变化是多成分综合作用的结果,且酚酸类成分的存在可以加速牛蒡苷的分解。本文对牛蒡子炮制过程脂肪油类成分进行研究。采用GC-MS法研究牛蒡子炮制过程中脂肪油类成分的变化,结果显示,牛蒡子炮制过程中,脂肪油成分发生了显著的变化。在180℃炮制过程中,共检测到38个成分,其中生品检测到21个成分,不同时间点炮制品中检测到17个成分。炮制过程中,有21个成分消失,新生成了17个成分。由于牛蒡子具有润肠通便,降气下行的功效,因此,具有润肠通便作用的脂肪油类成分含量降低,可能是炮制后“缓和寒滑之性”的重要物质基础和炮制机理。通过本论文研究,建立了牛蒡子多指标定量和指纹图谱相结合的质量评价方法,拟定了牛蒡子多指标质量控制标准。同时,研究揭示了牛蒡子炮制过程主要成分的变化规律,探讨了化学成分变化与牛蒡子炮制机理的相关性,为全面阐明牛蒡子炮制机理奠定了基础,为下一步的谱效相关性研究提供了理论依据。
【关键词】：牛蒡子 质量评价 化学成分 变化规律
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R284
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