UHRF1在骨肉瘤细胞侵袭过程中的作用及其机制研究

发布时间：2017-08-30 09:13

  本文关键词：UHRF1在骨肉瘤细胞侵袭过程中的作用及其机制研究

  更多相关文章： UHRF1 骨肉瘤细胞 Rb1 E-Cadherin 上皮细胞向间叶细胞转化 CXCL12 诱导耐药 凋亡途径 骨肉瘤

【摘要】：骨肉瘤作为最常见的原发于骨组织的恶性肿瘤,在儿童和青少年的肿瘤中较为常见,通常具有恶性程度高,易复发和转移,预后差的特征。尽管随着肿瘤切除术、生物治疗和新辅助化疗技术的联合应用,骨肉瘤的治愈率在近年来是有所提高的,但在骨肉瘤患者中出现肺转移的病人,总体生存率仍低于50%。因此新型的分子生物学治疗成为未来治疗骨肉瘤的必然选择方向。UHRF1是一个具有多个结构域的核蛋白,其生理作用可以促进细胞增殖和促进细胞凋亡,在保持DNA的甲基化状态及表观修饰的遗传起着重要作用。近年来发现在多种恶性肿瘤细胞中异常高表达,且密切地参与了肿瘤的发生、侵袭、转移及放化疗敏感性抵抗,由此可能成为肿瘤基因治疗的一个新靶点。但是UHRF1在骨肉瘤细胞中的作用并不明了,在本实验中,我们研究UHRF1在骨肉瘤细胞中侵袭过程中的作用,及其相关作用机制。目的： 1.研究UHRF1在骨肉瘤细胞的侵袭过程中的所发挥的作用2.研究UHRF1在骨肉瘤细胞的侵袭过程中的作用机制方法： 1.检测UHRF1在骨肉瘤细胞系MG-63,Saos-2,U2OS和HOS中的表达水平,然后利用CCK-8增殖实验来检测过表达UHRF1对骨肉瘤细胞系增殖能力的影响。2.利用Transwell侵袭实验检测UHRF1对骨肉瘤细胞MG-63,Saos-2,U2OS和HOS侵袭能力的作用3.Western blot检测骨肉瘤细胞中Rb1基因的表达水平,然后采用慢病毒感染干扰Rb1基因阳性细胞中的Rb1基因表达,检测UHRF1对其侵袭能力的影响。4.Western blot检测过表达UHRF1对骨肉瘤细胞对Rb1和E-Cadherin的作用。5.检测UHRF1在骨肉瘤细胞上皮细胞向间叶细胞的转化中的作用。结果： 1.骨肉瘤细胞MG-63,Saos-2,U2OS和HOS均有UHRF1表达,而且过表达UHRF1促进了骨肉瘤细胞的增殖。2.UHRF1增加了Rb1基因阳性的MG-63的侵袭能力,而对于无Rb1基因的Saos-2则无明显作用。3.干扰Rb1基因阳性细胞中的Rb1基因后,发现过表达UHRF1对其侵袭能力失去调控作用。4.UHRF1通过抑制Rb1基因来抑制E-Cadherin5.UHRF1促进了Rb1表达阳性细胞的上皮细胞向间叶细胞的转化。结论： 1.UHRF1促进了骨肉瘤细胞的增殖能力并增加了骨肉瘤细胞的侵袭能力,促进了上皮细胞向间叶细胞的转化。2.UHRF1增加了骨肉瘤细胞的侵袭能力是依赖Rb1表达状态的。3.UHRF1通过抑制Rb1基因表达,进而下调E-Cadherin的表达,从而增加了骨肉瘤细胞的侵袭能力,促进了上皮细胞向间叶细胞的转化在以往的研究中,MTX和docetaxel被证实对骨肉瘤的治疗有很有意义的作用。而对化疗耐药,是影响化疗疗效的主要屏障。与普通耐药的形成机制不同,药物压力性诱导有着不一样的形成机制。我们在此研究中应用基因芯片技术高通量地筛选U2OS和MG63耐药细胞细胞株与亲本细胞株之间的公共差异基因表达.明确其发挥的主要调控作用及其下游通路,进一步了解骨肉瘤耐药的可能机制,为骨肉瘤多药耐药的逆转寻找新的靶点。目的： 1.探讨 CXCL12在MTX和docetaxel诱导性骨肉瘤耐药中的作用2.探讨 CXCL12在MTX和docetaxel诱导性骨肉瘤耐药中的作用机制。方法： 1.对MTX和docetaxel诱导性骨肉瘤耐药细胞株进行体外连续培养;2.基因芯片检测基因表达变化;3.检测其公共差异基因下游凋亡途径。结果： 1.耐药细胞构建成功;2.基因检测提示CXCL12为唯一非passager基因;3.凋亡途径检测提示Bcl-xl的表达被下调。结论 ：1.CXCL12是MTX和docetaxel诱导性骨肉瘤耐药的主动调控因子。2.CXCL12通过下调Bcl-xl来促进骨肉瘤耐药。
【关键词】：UHRF1 骨肉瘤细胞 Rb1 E-Cadherin 上皮细胞向间叶细胞转化 CXCL12 诱导耐药 凋亡途径 骨肉瘤
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R738.1
【目录】：

• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-14
• 常用缩写词中英文对照表14-16
• 第一部分 UHRF1在骨肉瘤细胞的侵袭过程中的作用及其机制16-68
• 前言16-19
• 1 材料和方法19-47
• 1.1 实验仪器19-21
• 1.2 实验试剂21-26
• 1.3 实验方法26-46
• 1.4 统计方法46-47
• 2 结果47-57
• 3 讨论57-60
• 4 结论60-61
• 参考文献61-68
• 第二部分 CXCL12 在诱导骨肉瘤耐药过程中的作用及其机制68-104
• 前言68-70
• 1 材料与方法70-96
• 1.1 实验仪器70-72
• 1.2 实验试剂72-81
• 1.3 实验方法81-95
• 1.4 统计方法95-96
• 2 结果96-99
• 3 讨论99-101
• 4 结论101-102
• 参考文献102-104
• 综述104-117
• 参考文献112-117
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果117-118
• 致谢118-120
• 个人简介120

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本文编号：758418