肾虚痰阻与AD的关系及补肾化痰益智法治疗AD的作用研究

发布时间：2017-09-26 06:12

  本文关键词：肾虚痰阻与AD的关系及补肾化痰益智法治疗AD的作用研究

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【摘要】：目的:阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是以渐进性记忆障碍,认知功能障碍、人格改变以及语言障碍等神经精神症状为特征的中枢神经系统退行性疾病,是世界上最常见的痴呆性疾病,影响超过1.5亿人。随着我国老龄化人口数量的增长,加强对阿尔茨海默病病因病机的研究,并对其开展有效的防治措施及药物治疗,这显得尤为迫切和重要。因此,本论文在阐述阿尔茨海默病病因病机的基础上,进一步深入探讨补肾化痰益智法临床应用的理论依据,并以APP/PS1双转基因小鼠为研究对象,研究其代表方——补肾化痰益智方治疗AD的作用及机制,为中医药治疗阿尔茨海默病提供坚实的理论基础和科学的实验依据。方法:1、理论探讨:通过整理并分析古今相关文献对阿尔茨海默病的记载与论述,总结祖国医学对本病病因病机的认识,探讨以肾虚为主的五脏亏虚与阿尔茨海默病的关系、肾虚与痰阻的关系,从而进一步阐述其病因病机及临床的治则治法。2、实验研究:选用APP/PS1双转基因小鼠模型,以Aβ沉积为靶点,从分子生物学水平研究补肾化痰益智方治疗AD的机制。通过Morris水迷宫实验、穿梭箱实验、跳台实验这三种行为学检测方法,观察小鼠的学习记忆力的改变;透射电镜观察小鼠海马CA1区神经元及突触的病理改变;免疫组织化学染色法观察小鼠海马Aβ1-40、Aβ1-42染色改变,免疫组织化学染色法及Western Blot法观察Aβ主要生成分泌酶和降解酶(α-分泌酶:ADAM-10,β-分泌酶:BACE1,降解酶:NEP、IDE)的表达,影响Aβ脑内转运的RAGE、LRP1的表达及海马NF-κB的表达。ELISA法检测IL-1β、TNF-α含量。流式细胞仪检测各组小鼠外周血黏附分子含量(CD11a、CD11b、CD18、CD54、CD62L)的变化。结果:morris水迷宫实验显示,在整个定位航行实验过程中,与模型组比较,各给药组小鼠能较快找到逃生平台,并且随着训练的时间延长,学习趋势不断增强,尤以补肾化痰益智方高剂量组效果更为好。空间搜索实验中,与模型组比较,补肾化痰益智方组小鼠的穿越平台次数、第一象限时间明显增加(p0.01,p0.05)及第一次穿越平台时间明显缩短(p0.01)。跳台测试实验结果显示,各给药组小鼠的潜伏期与模型组比呈明显缩短,其出错次数也较之明显减少(p0.01)。穿梭箱实验结果显示,补肾化痰益智方组小鼠的主动回避次数较模型组明显增加(p0.01,p0.05),而主动回避潜伏期、被动回避潜伏期明显缩短(p0.01)。说明补肾化痰益智方能较好的改善app/ps1双转基因小鼠的学习、记忆能力。透射电镜观察,补肾化痰益智方对小鼠海马神经元及突触有保护作用;免疫组织化学染色法结果显示与空白组比较,模型组海马dg区神经细胞aβ1-40、aβ1-42染色较深,且模型组偶可见老年斑染色。与模型组比较,各给药组海马dg区神经细胞aβ1-40、aβ1-42染色较浅。免疫组化、weston-blot结果显示与空白组比较,模型组adam-10、nep、ide表达显著性降低(p0.05,p0.01);bace1、rage、lrp1、nf-κb表达显著性升高(p0.05,p0.01)。与模型组比较,各给药组adam-10、nep、ide表达显著性升高(p0.05,p0.01);bace1无显著性差异(p0.05);而rage、lrp1、nf-κb表达显著性降低(p0.05,p0.01)。elisa检测结果显示,与空白组比较,模型组小鼠海马il-1β和tnf-α明显增加(p0.01);与模型组比较,其余各给药组大鼠海马il-1β和tnf-α明显减少(p0.05,p0.01)。流式细胞仪检测结果显示与空白组比较,模型组小鼠外周血黏附分子cd11a、cd11b、cd18、cd54、cd62l含量均明显降低(p0.05,p0.01);与模型组比较,各给药组外周血黏附分子cd18、cd54含量均明显升高(p0.05,p0.01),而cd11a、cd11b、cd62l含量无明显差异(P0.05)。结论:1、肾虚是AD的病机之本,痰阻是AD的病机之标。补肾化痰益智法是防治AD的重要治法。2、补肾化痰益智方能够改善APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力,对其海马组织神经元、突触有一定保护作用。3、补肾化痰益智方治疗AD的作用机制与减少APP/PS1双转基因小鼠海马组织Aβ生成,促进Aβ降解及转运,减轻炎症反应,调节其外周血中黏附分子有关。
【关键词】：补肾化痰益智法 阿尔茨海默病 肾虚 痰阻 Aβ 神经炎症
【学位授予单位】：湖北中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R277.7
【目录】：

• 摘要6-9
• Abstract9-13
• 缩略词表13-15
• 前言15-16
• 第一部分 补肾化痰益智法治疗AD的理论探讨16-31
• 1 古代文献对AD的记载及论述16-18
• 2 中医学对AD病因病机的认识18-27
• 2.1 肾虚是AD的病机之本19-24
• 2.2 痰阻是AD的病机之标24-27
• 3 补肾化痰益智治法探讨27-31
• 3.1 补肾填精健脑27
• 3.2 化痰开窍益智27-31
• 第二部分 补肾化痰益智法对AD动物模型作用的实验研究31-61
• 实验一 补肾化痰益智方对APP/PS1双转基因小鼠学习、记忆的影响32-39
• 1 实验材料32-33
• 1.1 实验动物32
• 1.2 实验药物32
• 1.3 实验仪器32-33
• 2 实验方法33-35
• 2.1 动物分组及给药33
• 2.2 Morris水迷宫实验33-34
• 2.3 跳台实验34
• 2.4 穿梭箱实验34-35
• 2.5 统计学处理35
• 3 实验结果35-39
• 3.1 Morris水迷宫实验结果35-37
• 3.2 跳台测试实验结果37-38
• 3.3 穿梭箱测试实验结果38-39
• 实验二 补肾化痰法对APP/PS1双转基因小鼠海马Aβ 沉积的影响39-56
• 1 实验材料39-41
• 1.1 实验仪器39
• 1.2 实验试剂39-41
• 1.3 实验所用主要溶液的配制41
• 2 实验方法41-46
• 2.1 取材41-42
• 2.2 电镜观察42
• 2.3 免疫组织化学染色42-43
• 2.4 Western-blot法检测43-45
• 2.5 统计学处理45-46
• 3 实验结果46-56
• 3.1 小鼠海马CA1区电镜结果46-50
• 3.2 小鼠海马Aβ1-40、Aβ1-42免疫组织化学染色结果50
• 3.3 小鼠海马组织ADAM-10、BACE1蛋白的表达50-52
• 3.4 小鼠海马组织NEP、IDE蛋白的表达52-53
• 3.5 小鼠海马组织RAGE、LRP1蛋白的表达53-56
• 实验三 补肾化痰益智方对APP/PS1双转基因小鼠海马及外周血炎症相关因子的影响56-61
• 1 实验材料56
• 1.1 实验动物56
• 1.2 实验药物56
• 1.3 实验仪器56
• 1.4 实验试剂56
• 1.5 实验所用主要溶液的配制56
• 2 实验方法56-58
• 2.1 取材56
• 2.2 免疫组化及weston-blot检测56-57
• 2.3 ELISA法检测57
• 2.4 流式细胞仪检测57
• 2.5 统计学处理57-58
• 3 实验结果58-61
• 3.1 小鼠海马组织NF-κB蛋白的表达58
• 3.2 ELISA法检测IL-1β、TNF-α 含量58-59
• 3.3 流式细胞仪检测各组小鼠外周血黏附分子含量59-61
• 第三部分 讨论61-77
• 1 实验动物模型的选择61-62
• 2 补肾化痰益智方对痴呆模型小鼠学习记忆的影响62-65
• 3 补肾化痰益智方对APP/PS1转基因小鼠Aβ 级联损伤的影响65-77
• 3.1 对小鼠海马神经元的损伤65-66
• 3.2 对小鼠海马Aβ 沉积的影响66-72
• 3.3 对小鼠海马及外周血炎症相关因子的影响72-77
• 结语77-78
• 参考文献78-87
• 附录 免疫炎症与AD关系的研究进展87-97
• 参考文献92-97
• 在校期间公开发表的学术论文及科研成果97-98
• 致谢98-99

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本文编号：921888