茴香霉素结合电激活对猪孤雌激活和体细胞核移植胚胎的体外发育的影响

发布时间：2018-04-28 23:00

  本文选题：茴香霉素 + MPF　； 参考：《延边大学》2017年硕士论文

【摘要】：孤雌激活与体细胞核移植在动物育种、生产转基因动物、建立动物模型、保护珍稀濒危动物、提供人造器官异种移植研究以及发育生物学的研究等方面有着重要的作用与意义。而卵母细胞激活是影响孤雌激活和体细胞核移植效率的重要因素之一。同时也是确定孤雌激活和核移植以及随后的克隆胚胎的发育的基本要素之一。因此,如何有效提高卵母细胞激活效率具有十分重要的意义。而茴香霉素是一种蛋白合成抑制剂,首次在牛孤雌激活胚胎和体细胞核移植激活处理上应用,发现能够显著提高牛的孤雌激活胚胎和体细胞核移植胚胎囊胚率并提高囊胚质量。但茴香霉素应用在猪的孤雌激活胚胎和体细胞核移植胚胎尚未见报道。所以在本研究中,我们利用蛋白质合成抑制剂茴香霉素在电激活后处理猪的孤雌激活胚胎和体细胞核移植胚胎来观察实验效果。我们获得以下试验结果:1.茴香霉素,CB组与未处理组对比胚胎排出第二极体。实验发现茴香霉素和未处理组与CB组相比在排出第二极体上差异显著。(51.9%and 51.6%vs.14.3%p0.05),结果说明茴香霉素不能抑制第二极体的排出。2.茴香霉素在1μg/mL与其他各个浓度下的胚胎发育到2-4细胞阶段有显著差异(table3-2)。通过Hoechest 33342染色的方法观察茴香霉素处理组与对照组(CB)在囊胚的细胞数上没有着显著性差异(table2),0.01 μg/mL,0.1 μg/mL药物浓度与1 μg/mL及对照组在达到囊胚的效率上有显著地差异(31.8%and 27.1%vs.0 and 16.7%,p0.05)。在最佳浓度下的茴香霉素处理不同的时间下观察胚胎发育能力。分别测量了 Oh,2h,4h,6h,下胚胎的发育能力,结果显示:茴香霉素是在处理2,4,6h下孤雌激活胚胎有最好的发育能力(39.5%,33.3%and29.2%vs.20.3%,p0.05)。同样,在胚胎发育到 2-4 细胞时期,以及囊胚平均细胞数上都没有显著差异。以上结果表明:茴香霉素的最佳处理条件为0.01 μg/mL下作用2h。3.6-DMAP,茴香霉素与未处理组对孤雌激活胚胎的影响,茴香霉素处理组和6-DMAP处理组与未处理组相比,在2-4细胞时期和囊胚平均细胞数上并无显著性差异,在胚胎发育情况上,茴香霉素处理组和6-DMAP处理组与未处理组相比,能够显著提高孤雌激活胚胎发育能力(37.6%and 30.0%vs 19.9%,p0.05)。4.孤雌激活胚胎在0.01μg/mL茴香霉素作用4h下测量MPF活性,结果显示茴香霉素处理下的孤雌生殖胚胎MPF水平明显低于对照组(361.3 pg/ml vs 254.2 pg/mL,p0.05)。5.在染色体我们对激活7天左右的分别来自茴香霉素处理组,6-DMAP处理组和对照组(CB)处理的早期囊胚进行核型分析。结果显示茴香霉素与6-DMAP处理组和对照(CB)差异显著(33.3%vs60%and 50%,p0.05)以上结果表明:在茴香霉素处理下可以降低囊胚染色体异常比例。6.PA胚胎在0.01μg/mL茴香霉素作用4h下通过RT-PCR检测多能性基因(Sox2,Oct4,Nanog)和凋亡基因(Blc-2,Bax),实验结果表明茴香霉素对PA囊胚的多能性基因和凋亡基因并无显著性影响。7.6-DMAP,茴香霉素与未处理组对SCNT胚胎的影响,茴香霉素处理组和6-DMAP处理组与未处理组相比,在2-4细胞时期和囊胚平均细胞数上并无显著性差异,在胚胎发育情况上,茴香霉素处理组与未处理组相比,能够显著提高SCNT胚胎发育能力(18.3%vs 4.2%p0.05)。结论:1)茴香霉素能够通过改变MPF活性来影响孤雌激活胚胎和体细胞核移植胚胎的发育能力。2)茴香霉素能够显著降低孤雌激活囊胚染色体异常比例。3)茴香霉素对孤雌激活囊胚的多能性基因(Sox2,Oct4,Nanog)和凋亡基因(Blc-2,Bax)并无显著影响。其中,茴香霉素处理的最佳条件为0.01 μg/mL,2h。
[Abstract]:In this study , we found that there was no significant difference ( 51.9 % and 51.6 % vs.14 . 3 % p . 05 ) . The results showed that there was no significant difference between the treatment group and the untreated group . The results showed that there was no significant difference between the treatment group and the untreated group . The results showed that there was no significant difference between the treatment group and the untreated group . Conclusion : 1 ) The development of embryo and somatic cell nuclear transfer embryos can be influenced by the change of MPF activity .

【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S828
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本文编号：1817252