美洲黑石斑鱼（Centropristis striata）“突眼”症的病原菌分离鉴定和组织病理学研究

发布时间：2018-10-05 21:28

【摘要】：近年来,养殖中美洲黑石斑鱼的“突眼”病症严重影响着其苗种繁育工作,给其养殖产业造成了巨额经济损失。本文在探究引发美洲黑石斑鱼(C.striata)患“突眼”症的相关病原和其病理学影响中:运用了生理生化和分子生物学、测酶活、显微病理学、超微病理学等相关研究方法。研究结果如下:1.美洲黑石斑鱼“突眼”症病原菌的分离鉴定:美洲黑石斑鱼的“突眼”症状表现为:眼球白浊、充血、异常增生。从眼球病灶部位分离纯化得到一株优势菌,在TCBS培养基上生长迅速,菌落中部隆起、黄色,有黏性,杆状菌,端生单鞭毛,属于革兰氏阴性菌,定名为CJG01。人工感染实验证实:其对美洲黑石斑鱼有较强的致病性,可引起幼鱼眼球突出、脱落。解剖感染组的幼鱼发现:患病幼鱼的肝脏、肾脏红肿、脾脏肿大,肠道内有淡黄色液体。其半致死浓度LD50为2.67×105 CFU/ml。API 20NE快速鉴定及相关生理生化实验结果表明:菌株CJG01的生长温度为28-37℃,最适温度为28℃,在含盐量0-5%之间的TSB培养基可生长,对弧菌抑制剂O/129敏感,氧化酶反应阳性,鸟氨酸脱羧酶反应阳性,V-P反应阴性,可同化甘露醇、麦芽糖、苹果酸,不能同化葡萄糖、阿拉伯糖、甘露糖、癸酸、已二酸、柠檬酸、苯乙酸等,菌株CJG01的生理生化特性与哈维氏弧菌一致。对病原菌的16SrDNA序列对比分析及系统进化树分析表明,菌株CJG01与哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)序列同源性最高,达99%。药敏实验证实,该菌株对氨苄西林、头孢氨苄、头孢拉定、诺氟沙星、青霉素、阿奇霉素、多粘菌素B,等8种药物不敏感,对头孢唑林、恩诺沙星、链霉素、红霉素、克拉霉素,等4种药物中度敏感,对抗生素头孢哌酮、头孢曲松、头孢他啶、氧氟沙星、洛美沙星、氟罗沙星、环丙沙星、氯霉素、新生霉素、新霉素、庆大霉素、卡那霉素、呋喃唑酮、利福平、四环素、米诺环素,等16种药物敏感。2.哈维氏弧菌CJG01病原株对美洲黑石斑鱼血清生化指标的影响:与健康黑石斑鱼相比,患病幼鱼血清的总蛋白、白蛋白、甘油三酯、总胆固醇、尿素氮的含量显著降低(P0.05),肌酐含量显著增加(P0.05),球蛋白的含量没有显著性差异;患病幼鱼血清的乳酸脱氢酶活性的显著增强,谷草转氨酶、谷丙转氨酶、乳酸脱氢酶、溶菌酶的酶活性均显著增强(P0.05);患病幼鱼血清的K+含量的显著降低(P0.05),Cl-含量显著增加(P0.05),Na+、Ca2+的含量没有显著性差异。这表明患“突眼”症的美洲黑石斑鱼的,肌肉、肝脏、肾脏等组织器官损伤严重,肝功能、肾功能异常。3.哈维氏弧菌CJG01病原株对美洲黑石斑鱼的显微病理学影响:患病幼鱼的眼球肿胀,含有囊状物,晶状体部位含有凝血块;肌纤维损伤坏死;心脏肌节模糊不清,红细胞增多;肝中央静脉扩张充血,肝细胞空泡变性,部分肝细胞核溶解、消失,大量的淋巴细胞、单核细胞等炎性细胞浸润于肝细胞间质;脾脏组织坏死,红细胞破裂,脾脏充血,淋巴细胞增多;部分黏膜细胞脱落、坏死,胃底腺细胞排列疏松,胃底腺细胞空泡变性;大量炎性细胞浸润于肠道黏膜层、黏膜下层,肠绒毛坏死;肾间质淤血,大量红细胞浸润,肾小球毛细血管充血,肾小管管壁细胞空泡变性、坏死,细胞核溶解、消失;鳃组织的病理变化不显著。4.哈维氏弧菌CJG01病原株对美洲黑石斑鱼的超微病理学影响:患病幼鱼的神经突触间质充血,角膜的成纤维细胞坏死,胶原蛋白溶解。肌原纤维超微结构,H带模糊,M线模糊,肌原纤维断裂,线粒体数量减少,部分线粒体解体。心肌纤维的H带不清楚,M线不清楚,I带不清楚,Z线不清楚,肌原纤维断裂。肝细胞肿大、变形,一些肝细胞核被挤压,偏离细胞中心。细胞核膜界限模糊,胞质内的线粒体数量含量降低,部分线粒体解体。粗面内质网断裂,空泡化严重,脂滴充满整个肝细胞质,细胞器溶解、弥散于细胞核周围,溶酶体增多,部分肝脏细胞坏死、凋亡。脾脏组织的淋巴细淋巴细胞数量减少,淋巴细胞溶解死亡,细胞质细胞器崩解,核膜破坏。患病幼鱼胃组织的细胞界限模糊,核膜破坏,细胞核浓缩,细胞器溶解。肠上皮细胞细胞界限模糊,细胞空泡化严重。肾上皮细胞部分坏死,细胞核溶解,同时细胞内溶酶体含量增多,幼鱼第一近曲小管,内皮细胞坏死,细胞界限模糊,绒毛脱落。鳃丝,细胞界限清晰,细胞器完好,没有发生明显的病理变化。
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【学位授予单位】：上海海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S943

【参考文献】