台湾独蒜兰组织培养的研究

发布时间：2018-11-09 10:49

【摘要】：为保护野生台湾独蒜兰(Pleione formosana),尽快建立台湾独蒜兰的快繁体系,本文对江西井冈山野生台湾独蒜兰进行引种到温室栽培,进行人工授粉,所得蒴果和野生植株蒴果一同作为本研究的试验材料。将蒴果进行4℃低温保存,经0 d、1 d、2 d、3 d、4 d、10 d、13 d、20 d、25 d、30 d保存后对种子进行活性检测,以6-BA、NAA为2因素,各取3水平设计种子无菌萌发的试验;以无菌萌发得到的原球茎为材料,以6-BA、NAA、蔗糖为3因素设计原球茎增殖的正交试验,以6-BA、NAA、TDZ为3因素设计原球茎膨大的正交试验;以前者萌发得到的原球茎为外植体,以6-BA、NAA、TDZ为3因素设计原球茎分化的正交试验,以MS、1/2MS为基本培养基,添加不同浓度的NAA设计台湾独蒜兰幼苗的生根试验;以75%酒精、0.1%升汞、饱和次氯酸钙为消毒剂,采用单次和二次消毒方法对台湾独蒜兰根进行消毒,用切段和研磨两种方法进行接种,分离提取菌根内生真菌,探究台湾独蒜兰根较好的消毒方法,以木屑和树皮等比例混合物为培养基,将分离得到的菌根真菌和保存的种子共生萌发培养,寻找能够促进种子萌发的真菌。1、低温贮藏对种子活性0 d、1 d、2 d、3 d、4 d、10 d、13 d、20 d、25 d、30 d进行种子活性的检测,0 d种子活性为76.25%,1 d种子活性为80.84%,2 d种子活性最高,为93.87%,3 d种子活性为92.24%并开始下降,在20 d的时候种子活性为83.28%,30 d时候种子活性下降到65.80%,由此可见最佳的播种时间为采摘贮藏2 d,最好在20 d内进行播种;通过观察统计无菌萌发的萌发率均达到90%以上,其中最早萌发的培养基为1/2MS+0.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA,但是后期分化的幼芽体势较弱;萌发后原球茎保持时间较久的培养基配比为1/2MS+0..5~1.0 mg/L NAA。2、最佳原球茎增殖的培养基为MS+0.2 mg/L NAA+1.5 mg/L 6-BA+50 g/L蔗糖,增殖系数为3.150。通过分析增殖系数主体间效应检验得出6-BA、NAA对原球茎增殖作用显著,蔗糖对原球茎的增殖作用不显著。3、最佳蔗糖膨大培养基为MS(固体)+6%蔗糖,膨大系数为3.065;最佳激素膨大培养基为MS+0.5mg/L 6-BA+1.5mg/L NAA,膨大系数为3.205,6-BA和NAA对原球茎膨大作用显著,同时得出NAA比6-BA作用效果更显著,TDZ对原球茎膨大作用不显著。4、最佳分化培养基为MS+0.6 mg/L TDZ+1.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA,分化率为84.1%,6-BA和NAA对原球茎分化效果显著,TDZ对原球茎分化效果极显著;最佳生根培养基为1/2MS+0.5 mg/L NAA,生根率为85.4%,总株数为120株,总生根条数为213条,平均生根数为1.8条/株。5、优化的消毒步骤为75%酒精30 s→0.1%升汞60 s,90 s,120 s,接种方法为研磨接种,分离提取到73种真菌;经过共生萌发培养,发现7种内生真菌不能促进种子萌发,66种内生真菌能够促进种子萌发形成原球茎,其中29种能够促进种子萌发形成黄绿色原球茎,37种能够促进种子萌发形成绿色原球茎;随着培养时间的增加,所有萌发的原球茎均没有进行分化形成幼苗。
[Abstract]:In order to protect wild (Pleione formosana), and establish its rapid propagation system, the wild garlic orchid of Jinggang Mountain, Jiangxi Province, was introduced into greenhouse and pollinated by artificial pollination. The obtained capsule and wild plant capsule were used as experimental materials in this study. The capsule was preserved at low temperature at 4 鈩，

本文编号：2320183