异育银鲫迟缓爱德华氏菌病的研究

发布时间：2018-11-11 21:58

【摘要】：异育银鲫(Carassius auratus gibelio)具有生长快、个体大、抗逆性强等特点,在养殖生产中显示出良好的经济性状。随着养殖集约化的发展,导致水环境恶化,同时,养殖户对疾病防控的意识薄弱,导致水产病害频发。2015年,上海滨海基地的异育银鲫发生了出血性败血病,为探究病原,对疫区进行疾病调查,通过病原菌的筛查、分离、鉴定、回感试验,确定发病原因;对病原菌的16S rRNA基因、管家基因(gyrB和rpoB)的测序,建立致病菌系统进化树,结合ATB和Biolog细菌鉴定系统对致病菌进行生理生化鉴定,综合判定致病菌的种类及其分类地位;腹腔注射法人工感染异育银鲫,对发病鱼的肝胰腺、肾脏、脾脏、鳃和肠道进行组织病理观察,明确致病菌的主要侵染器官;测定致病菌的脲酶、明胶酶、脂酶、淀粉酶和溶血性等与致病相关指标,根据已报道的7个毒力基因序列,设计引物进行PCR扩增,研究病原菌毒力基因携带情况;最后对致病菌进行药物敏感性实验和免疫防治,为生产实践提供参考。通过走访调查显示:异育银鲫的出血性败血症发生在2015年6-9月,发病时养殖水体的温度为25-27℃,现场死亡率为20%-30%。初期症状为摄食量减少,伏于池底不动;随后病情加重,表现为全身性充血、出血,腹部肿胀,腹部鳞片基部严重出血,鳍条充血以至出血,肛门红肿出血并伴有脓样液体流出。腹腔中有黄色浑浊腹水,肝胰腺充血,肌肉充血出血,呈现典型的细菌性败血症症状。从濒死异育银鲫内脏分离到一株致病菌GY 15,腹腔注射感染和浸泡感染都能导致异育银鲫的发病和死亡,其中,腹腔注射感染的半数致死量(LD50)为4.26×105 CFU/mL,且人工感染的发病症状与塘口病鱼相似。通过生理生化和分子生物学方法对GY 15菌株进行鉴定。API-32E鉴定结果为迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda),鉴定率值为99.9%,鉴定评语为极好的鉴定;Biolog的鉴定结果与E.tarda的位距为6.381,相似性为0.569,获得了比较好的鉴定结果,分子生物学(16S rRNA基因和多位序列分型)的鉴定结果与E.tarda聚为一支。综合以上结果,确定GY 15菌株为E.tarda。GY 15菌株是导致异育银鲫出血性败血症的新病原,并对异育银鲫的养殖造成威胁。人工感染的异育银鲫在肝胰腺、肾脏和脾脏表现的病理变化最为严重。肝胰腺主要表现为细胞肿胀、空泡变性和细胞坏死;肾脏主要表现为肾实质细胞坏死、炎性细胞浸润;脾脏主要表现为大量铁血黄素色素沉着、细胞坏死和炎性细胞浸润;鳃组织主要表现为鳃小片的上皮细胞、柱细胞肿胀和外出血症状;肠道病理损伤最小。GY 15菌株对脲酶、明胶酶、脂酶、淀粉酶和溶血性均无活性;而7个毒力基因在GY 15菌株中均能检测到,分别为sodB(490 bp)、katB(377 bp)、esrB(454bp)、gadB(308 bp)、fimA(839 bp)、citC(553 bp)和mukF(303 bp)。GY 15是一株强毒株,综合国内分离的E.tarda的毒力基因携带情况,认为用fimA和(或)gadB基因可以对致病性E.tarda进行快速鉴定。用免疫防治和药敏试验来探讨对迟缓爱德华氏菌病的防治方法,注射灭活疫苗和灭活佐剂疫苗能提高血清中超氧歧化酶活性(SOD)和溶菌酶活性(LZM),灭活疫苗和灭活佐剂疫苗对异育银鲫的免疫保护率分别为26.18%和30.42%,未达到很好的免疫保护效果;药敏试验结果显示,该菌对恩诺沙星、氟苯尼考和氧氟沙星等26种药物敏感,对新霉素、四环素和复方新诺明等18种药物表现为耐药。在水产养殖中,建议用恩诺沙星、氟苯尼考和诺氟沙星进行抗生素治疗。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：上海海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S943

【参考文献】