【摘要】：亚麻酸(18:3n-3,LNA)对甲壳动物生长、免疫、抗氨氮胁迫和脂质代谢具有重要的调节作用,本研究采用营养学、生物化学和分子生物学的相关技术与方法,系统地研究了亚麻酸(18:3n-3,LNA)对日本沼虾(Macrobrachium nipponense)的营养生理作用。分析了饲料LNA水平对日本沼虾幼虾生长性能、抗氧化、非特异性免疫性能和抗氨氮胁迫的影响;探讨了饲料LNA水平机体脂肪酸组成及脂质代谢相关基因的影响;克隆了Δ6脂肪酸去饱和酶(Δ6 FAD)基因,分析了该基因的分子结构,探讨了饲料LNA水平对其表达的影响。具体研究结果如下:配制LNA含量分别为0%(L0,对照组)、0.5%(L0.5)、1.0%(L1.0)、1.5%(L1.5)、2.0%(L2.0)和2.5%(L2.5)的6组等氮等脂的半纯化饲料,饲养日本沼虾幼虾(始均重为0.12±0.01 g)8周,之后进行24 h氨氮(氯化铵浓度为36.60mg/L)胁迫,分析对日本沼虾幼虾生长、存活、抗氧化能力、非特异性免疫性能和氨氮胁迫下生理指标的影响,探讨日本沼虾幼虾饲料中适宜LNA添加量。结果表明:日本沼虾特定生长率、增重率和存活率均随饲料LNA水平的升高呈先升后降的趋势;随着饲料中LNA添加量的增加,日本沼虾肝胰腺SOD、GSH-Px活性和T-AOC基本呈现先升后降的趋势,且都在L1.0组达到最高,显著高于其余各组(P0.05);L0组肝胰腺中MDA含量显著高于其余各组(P0.05);饲料LNA水平的增加显著提高了ACP和LYZ的活性,分别在L1.0组和L1.5组达到最高值;氨氮胁迫后,L0组的MDA显著高于LNA添加组,在LNA添加量达1.5%时,MDA含量显著低于其余各组(P0.05),同时肝胰腺T-SOD、GSH-Px和T-AOC活性均随饲料LNA含量升高呈先上升后下降趋势,其中T-SOD活性在L1.5组达到最高,而T-AOC和GSH-Px在L1.0组活性达到最高。以SOD活性为指标,经二次回归方程分析表明,日本沼虾有效LNA需要量为1.19%。综上,饲料LNA添加量在1.0%~1.5%之间时,能显著提高日本沼虾幼虾抗氧化性能和免疫力,缓解氨氮胁迫对其造成的负面影响。亚麻酸是合成机体HUFA的前体,通过添加LNA来调控机体HUFA含量对降低饲料成本具有重要意义。饲喂日本沼虾LNA含量分别为0%(L0,对照组)、0.5%(L0.5)、1.0%(L1.0)、1.5%(L1.5)、2.0%(L2.0)和2.5%(L2.5)的6组等氮等脂的半纯化饲料,分析其机体脂肪酸组成及脂质代谢相关基因表达量。结果表明:日本沼虾肝胰腺脂肪含量随着饲料LNA含量的增加降低,L2.5组脂肪含量显著低于其余各组。肌肉及肝胰腺LNA含量随着饲料LNA含量的增加而增加,肌肉及肝胰腺20:5n-3、22:5n-3和22:6n-3含量高于其在饲料中的含量,但肌肉及肝胰腺组织20:5n-3、22:5n-3和22:6n-3含量并不随机体的LNA增加而增加。乙酰辅酶A(ACC)、△9去饱和酶(SCD)和脂肪酸延长酶6(elovl6)mRNA表达量均随饲料中LNA含量的升高呈现降低趋势,均在L2.5组达到最低值。而肉毒碱棕榈酰转移酶-1(CPT1)mRNA表达量均随饲料中LNA含量的升高呈现升高趋势,在L2.0组和L2.5组达到最高值。本研究表明,饲料LNA水平可以通过影响脂肪酸合成途径及β氧化途径降低机体脂肪含量,并通过影响脂肪酸去饱和酶和延长酶mRNA表达调节机体脂肪酸组成。Δ6 FAD是HUFA合成过程中的限速酶。采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆得到日本沼虾Δ6 FAD cDNA全长序列,并利用荧光定量PCR技术分析其在肝胰腺、心脏、肌肉、肠道、胃、鳃、血液、卵巢、卵子等9种组织的表达,同时分析饲料LNA水平对Δ6 FAD基因表达的影响,结果表明:Δ6 FAD全长序列为1906 bp,其中5'非编码区(UTR)含122 bp,3'非编码区(UTR)含394 bp,开放阅读框(ORF)包含1362 bp,总共编码453个氨基酸,并且编码的蛋白序列具有典型的去饱和酶特性:1个HPGG结构域、3个组氨酸保守区和1个N端细胞色素b5结构域。组织表达结果显示,Δ6 FAD基因在日本沼虾各个组织中均有表达,高表达于肌肉组织,且其表达水平显著高于其他组织(P0.05),其次是卵子和鳃组织,在肝胰腺组织中表达量最低。饲料LNA水平上调Δ6 FAD基因的表达量。饲料中LNA水平显著上调肝胰腺Δ6 FAD基因的表达量,在L2.5组达到最大值。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：大连海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S968.22
【参考文献】
相关期刊论文 前10条
1 赵利斌;王鑫磊;黄旭雄;陈春燕;李航;;饲料中花生四烯酸水平对凡纳滨对虾免疫相关基因表达及抗菌能力的影响[J];水产学报;2016年05期
2 杨志刚;姚琴琴;成永旭;施秋燕;杨青;何杰;马明君;王瑶;常东;;中华绒螯蟹FAD6-b基因的全长克隆及原核表达分析[J];水产学报;2016年01期
3 张萍;薛伟伟;蒋雪薇;朱双;刘江东;;锦鲤Δ6脂肪酸去饱和酶基因克隆及表达研究[J];生物技术通报;2015年12期
4 施秋燕;杨志刚;王伟;姚琴琴;王瑶;成永旭;;三疣梭子蟹Δ6脂肪酸去饱和酶基因全长cDNA克隆与组织表达[J];生物技术通报;2015年09期
5 王莉梅;姚旭日;项静英;曹敏恺;刘睿杰;金青哲;王兴国;;α-亚麻酸对HepG2细胞增殖能力及氧化应激的影响[J];中国油脂;2015年06期
6 邹李昶;任夙艺;王志铮;朱卫东;吴一挺;;氨氮急性胁迫对日本沼虾(Macrobrachium nipponensis)死亡率、耗氧率及窒息点的影响[J];海洋与湖沼;2015年01期
7 赵卫红;於叶兵;王资生;吕富;吕林兰;;不同脂肪源饵料对日本沼虾抗氧化机能及肝胰腺和卵巢中脂肪酸含量的影响[J];江苏农业科学;2014年12期
8 丁志丽;张易祥;叶金云;周志金;杜震宇;;鱼粉蛋白与发酵酶解豆粕蛋白不同配比对日本沼虾生长及免疫性能的影响[J];动物营养学报;2015年01期
9 曹文婷;孙萍;李华艳;范枝芳;;n-3多不饱和脂肪酸在不同疾病中的研究进展[J];山西医药杂志;2014年14期
10 魏广莲;徐钢春;顾若波;杜富宽;徐跑;;刀鲚Δ6脂肪酸去饱和酶cDNA的克隆与组织表达检测[J];南京农业大学学报;2014年03期
相关博士学位论文 前1条
1 石苗茜;α-亚麻酸改善高血压胰岛素抵抗大鼠血管内皮细胞损伤的作用和机制研究[D];第四军医大学;2014年
相关硕士学位论文 前9条
1 袁禹惠;饲料中脂肪及花生四烯酸水平对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)稚鱼生长、脂肪酸组成及代谢相关基因表达的影响[D];中国海洋大学;2015年
2 关勇;亚麻籽油对吉富罗非鱼生长、体组成、脂质代谢及抗氧化能力的影响[D];西南大学;2014年
3 郭子好;中华绒螯蟹Δ6与Δ9去饱和酶在脂肪酸合成过程中的作用初探及延伸因子EF-1δ和EF-2的初步研究[D];上海海洋大学;2013年
4 郭兵;两株海洋微藻中Δ4-脂肪酸去饱和酶基因和Δ5-脂肪酸延长酶基因的克隆以及功能验证[D];中国农业科学院;2011年
5 胡长博;黄斑蓝子鱼△6脂肪酸去饱和酶cDNA的克隆及环境盐度、饲料脂类成分对其mRNA表达的影响[D];汕头大学;2007年
6 刘则学;亚麻籽中多不饱和脂肪酸在猪不同组织中的富集规律及对猪胴体品质的影响[D];华中农业大学;2006年
7 牛东红;V_C和V_E对日本沼虾蜕皮周期中呼吸代谢和抗氧化酶的影响[D];河北大学;2004年
8 徐杰;饵料中添加维生素D对日本沼虾生长的影响[D];河北大学;2001年
9 王丽平;饵料铜、磷和水体pH、温度对日本沼虾肌肉腺苷酸含量的影响[D];河北大学;2001年
，
本文编号：
2365681
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/zaizhiyanjiusheng/2365681.html
