辽宁绒山羊POMP基因在毛囊发育中的表达研究

发布时间：2017-03-29 00:00

  本文关键词：辽宁绒山羊POMP基因在毛囊发育中的表达研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：在本实验室前期构建的辽宁绒山羊毛囊兴盛期cDNA质粒文库中,经拼接测通后得到了辽宁绒山羊proteasome maturation protein(POMP)基因序列,旨在研究辽宁绒山羊PMOP基因在毛囊发育与绒毛生长中的作用。首先对POMP基因进行生物信息学分析,然后利用原位杂交技术对其进行定位分析;RT-PCR检测POMP基因在心、肝、肾、肺、脾、皮肤中表达信号;Real Time PCR检测该基因在毛囊发育的三个阶段的表达以及加入外源褪黑激素和FGF5以及IGF-1三种因子对辽宁绒山羊成纤维细胞进行培养后细胞中POMP基因的表达量变化。实验结果如下:生物信息学分析表明,辽宁绒山羊POMP基因全长1278bp,编码141个氨基酸,该蛋白基因与牛属同源性最高;原位杂交结果显示,在初、次级毛囊中,POMP在内根鞘中表达强烈,在皮质层、角质层以及髓质中也存在表达,外根鞘中未出现表达信号;RT-PCR显示,POMP基因在心、肝、肾、肺、脾、皮肤中均有表达;Real Time PCR检测结果显示,在辽宁绒山羊绒毛生长兴盛期和退行期,POMP基因次级毛囊中的表达量均高于初级毛囊中的表达量;外源褪黑激素、FGF5以及IGF-5细胞因子分别处理成纤维细胞结果显示,分别加入外源褪黑激素和IGF-1后POMP基因表达量低于对照组,加入10^(-5)g/L外源FGF5在处理羊成纤维细胞24小时后,POMP基因的表达量高于对照组。此外,褪黑激素和FGF5协同处理细胞后POMP的表达量低于对照组,褪黑激素与IGF-1协同作用于成纤维细胞后POMP基因表达量高于对照组。结论:POMP基因普遍存在于辽宁绒山羊各组织器官中,且参与调控初、次级毛囊发育的过程;外源褪黑激素和IGF-1能够抑制POMP基因的表达;10^(-5)g/L外源FGF5作用于羊成纤维细胞24小时,可提高POMP基因的表达;褪黑激素和FGF5协同可抑制POMP基因的表达,而褪黑激素与IGF-1协同作用可提高该基因的表达量。本实验为进一步研究POMP在辽宁绒山羊绒毛生长中的遗传作用机制提供了一定的理论基础。
【关键词】：POMP基因 信息学分析 原位杂交 荧光定量 MT FGF5 IGF-1
【学位授予单位】：辽宁师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S827
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 1 研究背景8-11
• 1.1 蛋白酶成熟蛋白（Proteasome maturation protein，POMP）8
• 1.2 辽宁绒山羊8-9
• 1.3 褪黑激素（MT）9
• 1.4 成纤维细胞因子FGF-59
• 1.5 类胰岛素细胞因子（IGF-1）9-10
• 1.6 研究目的及意义10-11
• 2 材料与方法11-20
• 2.1 实验材料11-12
• 2.1.1 样本采集11
• 2.1.2 实验试剂及仪器11-12
• 2.2 实验方法12-20
• 2.2.1 POMP基因信息学分析12-13
• 2.2.2 辽宁绒山羊初、次级毛囊的分离及其总RNA提取13-14
• 2.2.3 辽宁绒山羊原代皮肤细胞培养14-16
• 2.2.4 半定量RT-PCR16
• 2.2.5 实时定量PCR16-17
• 2.2.6 原位杂交17-18
• 2.2.7 褪黑激素、FGF5和IGF-5 分别处理羊成纤维细胞18-19
• 2.2.8 MT与IGF-1(MT与FGF5)协同培养羊成纤维细胞19
• 2.2.9 数据分析与统计19-20
• 3 实验结果20-39
• 3.1 蛋白酶成熟蛋白的物信息学分析20-26
• 3.2 RNA提取结果26-27
• 3.3 RT-PCR结果27-28
• 3.4 实时荧光定量PCR实验结果28-29
• 3.5 原位杂交结果29-30
• 3.6 褪黑激素处理羊体侧成纤维细胞30-32
• 3.7 FGF5处理羊体侧成纤维细胞32-34
• 3.8 IGF-1 处理羊体侧成纤维细胞34-37
• 3.9 褪黑激素与FGF5协同处理成纤维细胞37
• 3.10 褪黑激素与IGF-1 协同处理成纤维细胞37-39
• 4 讨论39-41
• 结论41-42
• 参考文献42-46
• 附录A β-Actin与POMP基因在初、次级毛囊中的扩增曲线和溶解曲线46-47
• 附录B β-Actin与POMP基因在褪黑激素处理皮肤成纤维细胞中的扩增曲线和溶解曲线47-51
• 附录C β-Actin与POMP基因在FGF5处理皮肤成纤维细胞中的扩增曲线和溶解曲线51-56
• 附录D β-Actin与POMP基因在IGF-1 处理皮肤成纤维细胞中的扩增曲线和溶解曲线56-61
• 附录E β-Actin与POMP基因在MT与FGF5协同处理皮肤成纤维细胞24小时中的扩增曲线和溶解曲线61-62
• 附录F β-Actin与POMP基因在MT与IGF-1 协同处理皮肤成纤维细胞24小时中的扩增曲线和溶解曲线62-63
• 致谢63

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