伪狂犬病毒SA215-T的构建与神经传导研究

发布时间：2017-03-30 12:14

  本文关键词：伪狂犬病毒SA215-T的构建与神经传导研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：伪狂犬病毒具有侵染神经的能力,利用这一性质,该病毒已成功应用于对内脏、腺体和肌肉的神经标记。伪狂犬病毒减毒株神经传导是目前较热门的研究方向。减毒株通常缺失了gE、gI和US9三个基因,其中gE和gI是伪狂犬病毒重要的毒力基因,缺失后可使宿主的致死时间更长,而US9的功能主要为协助gB等必需膜蛋白的顺行转运,缺失后的病毒在突触间将执行严格的逆向转运。采用Lipofectamine#174; 3000转染试剂,将PP63质粒与伪狂犬病毒Fa基因组DNA共转染BHK-21细胞,蚀斑筛选gI/gE/Us9重组缺失病毒,并命名为SA215-T。采用PCR、基因测序、western-blot、电镜检查和生长曲线测定重组病毒PRV SA215-T。结果：western-blot未见SA215-T与gE抗体发生显色反应,其电镜形态与野毒无明显差异,重组病毒与亲本毒在细胞中的生长曲线差异不明显且达到了较高的病毒滴度。为探索三种不同伪狂犬毒株SA215-T,亲本毒Fa和Bartha-K61对神经的传导作用,本实验以小鼠肱二头肌反射为模型,统计了小鼠攻毒后的存活时间并建立了检测脊髓伪狂犬病毒分布的免疫组化方法。结果：Fa小鼠平均存活时间为73.33h,与SA215-T(114.83h)或Bartha-K61 (120.67h)差异极显著(P0.01)；濒死小鼠脊髓与大脑经PCR和免疫组化检测,伪狂犬病毒主要位于颈椎C5-C6脊髓并集中分布于脊髓灰质运动神经元池区(motomeuron pool),部分C5-C6脊髓经PCR检测为阳性,而免疫组化检测为阴性。
【关键词】：伪狂犬病毒 gE/gI基因 重组病毒SA215-T C5-C6脊髓 神经传导
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S852.65
【目录】：

• 中文摘要4-5
• ABSTRACT5-6
• 缩略词表6-9
• 第一章 文献综述9-24
• 1 PRV9-22
• 1.1 PRV的概述9
• 1.2 对伪狂犬病毒认识的历程9-10
• 1.3 PRV的结构分子生物学10-14
• 1.4 束路追踪技术14-16
• 1.5 伪狂犬病毒神经示踪16-19
• 1.6 肌肉神经调控19-20
• 1.7 免疫组化方法简介20-22
• 3 研究的目的与意义22-24
• 第二章 伪狂犬病毒SA215-T的构建24-39
• 1 材料24-26
• 1.1 实验材料24-25
• 1.2 主要仪器25-26
• 2 实验方法26-33
• 2.1 伪狂犬病毒SA215-T的构建26-27
• 2.2 PP63质粒的制备27-32
• 2.3 重组病毒形态学鉴定32-33
• 3. 实验结果33-37
• 4. 讨论与分析37-39
• 第三章 小鼠肱二头肌神经传导研究39-50
• 1 主要材料、试剂与仪器39-40
• 1.1 实验材料39-40
• 1.2 主要仪器40
• 2 试验方法40-42
• 3 实验结果42-47
• 3.1 SA215-T神经毒力试验42-43
• 3.2 PCR鉴定伪狂犬脊髓分布情况43-44
• 3.3 免疫组化条件的确定44-46
• 3.4 免疫组化结果与PCR结果比较46-47
• 4 讨论47-50
• 全文总结50-51
• 参考文献51-57
• 附录57-58
• 致谢58

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