黄粉虫抗菌肽诱导方法的比较及实时荧光定量PCR分析

发布时间：2017-04-03 20:10

  本文关键词：黄粉虫抗菌肽诱导方法的比较及实时荧光定量PCR分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：为了给黄粉虫抗菌肽研究提供新的参考,探索黄粉虫抗菌肽的较优诱导方法,本论文以不同龄期的黄粉虫幼虫为试验材料,以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌作为诱导菌,微量注射、饲喂和针刺作为诱导方法诱导黄粉虫幼虫产生抗菌肽,对不同菌液浓度和不同方法诱导的不同龄期黄粉虫幼虫抗菌肽的抑菌效果进行研究,同时还进行了黄粉虫抗菌肽Tenecin 1、Tenecin 3、Tenecin 4 及ColeoptericinC四个基因的实时荧光定量PCR研究。结果如下：1、不同龄期的黄粉虫幼虫产生的抗菌肽抑菌活性上存在差异。采用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌作为诱导菌,对8龄、9龄和10龄的黄粉虫幼虫进行诱导后,发现其抗菌肽抑菌活性存在差异,在所有的诱导处理中,9龄幼虫的诱导效果好于8龄和10龄。2、不同菌液浓度诱导黄粉虫幼虫产生的抗菌肽抑菌活性上存在差异。将对数期浓度稀释10倍、100倍、1000倍,经3种不同浓度的菌液诱导后发现,在所有的不同菌液浓度诱导处理中,菌液浓度为对数期浓度的稀释100倍时效果较好。3、不同方法诱导产生的抗菌肽抑菌活性上存在差异。经相同浓度菌液诱导后发现,在所有的相同浓度菌液不同诱导方法处理中,微量注射诱导的效果较好。4、黄粉虫抗菌肽Tenecin基因实时荧光定量PCR结果。通过对黄粉虫抗菌肽的Tenecin 1、Tenecin 3.Tenecin 4 和ColeoptericinC4个基因进行实时荧光定量PCR分析后发现,除Tenecin 3基因经大肠杆菌诱导表达量下调外,其他抗菌肽基因都上调。
【关键词】：黄粉虫 抗菌肽 抑菌 实时荧光定量PCR
【学位授予单位】：福建农林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S433
【目录】：

• 摘要8-9
• Abstract9-10
• 第一章 文献综述10-17
• 1 黄粉虫的研究进展10-12
• 1.1 黄粉虫生活史10
• 1.2 黄粉虫开发与利用10-12
• 1.2.1 在食用方面11
• 1.2.2 在饲用、肥料方面11-12
• 1.2.3 在药用方面12
• 1.2.4 在其他方面12
• 2 抗菌肽的研究12-15
• 2.1 抗菌肽的概况12-13
• 2.2 抗菌肽的类型13-14
• 2.2.1 天然来源抗菌肽13
• 2.2.2 化学合成的抗菌肽13
• 2.2.3 基因工程来源的抗菌肽13-14
• 2.2.4 酶解获得的抗菌肽14
• 2.3 抗菌肽的生物学特性14
• 2.4 黄粉虫抗菌肽的研究14-15
• 3 实时荧光定量PCR技术的研究15-16
• 4 本文研究的目的与意义16-17
• 第二章 黄粉虫抗菌肽的诱导17-36
• 1 试验材料17-19
• 1.1 供试昆虫与菌种17
• 1.2 主要仪器与试剂17-18
• 1.2.1 主要仪器17
• 1.2.2 主要试剂17-18
• 1.3 培养基的配置18
• 1.4 试剂和缓冲液的配置18
• 1.5 菌种的活化18
• 1.6 虫龄的选择18-19
• 2 试验方法19-22
• 2.1 黄粉虫抗菌肽的诱导19-21
• 2.1.1 不同浓度菌液对黄粉虫幼虫抗菌肽的诱导19-20
• 2.1.1.1 微量注射不同浓度菌液对抗菌肽的诱导19
• 2.1.1.2 饲喂不同浓度菌液对抗菌肽的诱导19
• 2.1.1.3 针刺不同浓度菌液对抗菌肽的诱导19-20
• 2.1.2 特定浓度菌液对黄粉虫幼虫抗菌肽的诱导20-21
• 2.1.2.1 微量注射不同菌液量对抗菌肽的诱导20
• 2.1.2.2 饲喂不同比例的菌液与饲料对抗菌肽的诱导20
• 2.1.2.3 针刺不同次数对抗菌肽的诱导20-21
• 2.2 抗菌肽的提取21
• 2.3 抑菌试验21
• 2.4 数据处理方法21-22
• 3 结果与分析22-34
• 3.1 微量注射不同浓度菌液对黄粉虫幼虫抗菌肽的诱导22-24
• 3.1.1 微量注射不同浓度大肠杆菌菌液对黄粉虫幼虫抗菌肽的诱导22-23
• 3.1.2 微量注射不同浓度金黄色葡萄球菌对黄粉虫幼虫抗菌肽的诱导23-24
• 3.2 饲喂不同浓度菌液对黄粉虫幼虫抗菌肽的诱导24-26
• 3.2.1 饲喂不同浓度大肠杆菌菌液对黄粉虫幼虫抗菌肽的诱导24-25
• 3.2.2 饲喂不同浓度金黄色葡萄球菌菌液对黄粉虫幼虫抗菌肽的诱导25-26
• 3.3 针刺不同浓度菌液对黄粉虫幼虫抗菌肽的诱导26-28
• 3.3.1 针刺不同浓度大肠杆菌菌液对黄粉虫幼虫抗菌肽的诱导26-27
• 3.3.2 针刺不同浓度金黄色葡萄球菌菌液对黄粉虫幼虫抗菌肽的诱导27-28
• 3.4 微量注射相同浓度菌液对黄粉虫幼虫抗菌肽的诱导28-30
• 3.4.1 微量注射大肠杆菌菌液对黄粉虫幼虫抗菌肽的诱导28-29
• 3.4.2 微量注射金黄色葡萄球菌对黄粉虫幼虫抗菌肽的诱导29-30
• 3.5 饲喂不同比例菌液对黄粉虫幼虫抗菌肽的诱导30-32
• 3.5.1 饲喂不同比例大肠杆菌菌液对黄粉虫幼虫抗菌肽的诱导30-31
• 3.5.2 饲喂金黄色葡萄球菌菌液对黄粉虫幼虫抗菌肽的诱导31-32
• 3.6 不同针刺次数对黄粉虫幼虫抗菌肽的诱导32-34
• 3.6.1 针刺大肠杆菌对黄粉虫幼虫抗菌肽的诱导32-33
• 3.6.2 针刺金黄色葡萄球菌对黄粉虫幼虫抗菌肽的诱导33-34
• 4 小结与讨论34-36
• 4.1 不同龄期幼虫诱导效果比较34
• 4.2 不同浓度菌液诱导效果比较34
• 4.3 不同菌液与饲料比例诱导效果比较34-35
• 4.4 不同诱导方法效果比较35-36
• 第三章 黄粉虫抗菌肽Tenecin、Coleoptericin基因实时荧光定量PCR分析36-51
• 1 试验材料36-37
• 1.1 供试昆虫与菌种36
• 1.2 主要仪器与试剂36-37
• 1.2.1 主要仪器36-37
• 1.2.2 主要试剂37
• 2 试验方法37-41
• 2.1 黄粉虫总RNA的提取37-38
• 2.2 目的基因的引物设计38-39
• 2.3 实时荧光定量PCR检测39-41
• 2.3.1 RNA反转录39
• 2.3.2 荧光定量PCR检测39-41
• 2.3.2.1 实验样本39
• 2.3.2.2 PCR反应步骤39-40
• 2.3.2.3 仪器的操作40-41
• 3 结果与分析41-50
• 3.1 内参基因实时荧光定量结果41-42
• 3.2 目的基因Tenecin 1实时荧光定量结果42-44
• 3.3 目的基因Tenecin 3实时荧光定量结果44-46
• 3.4 目的基因Tenecin 4实时荧光定量结果46-48
• 3.5 目的基因Coleoptericin C实时荧光定量结果48-50
• 4 小结与讨论50-51
• 第四章 总结与讨论51-54
• 1 主要结论51
• 1.1 黄粉虫抗菌肽诱导方法比较51
• 1.2 实时荧光定量PCR分析51
• 2 讨论51-52
• 3 本研究的创新与不足52-53
• 4 展望53-54
• 参考文献54-58
• 附录Ⅰ58-61
• 附录Ⅱ61-64
• 致谢64

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本文编号：284905