四川部分地区CIAV分子流行病学调查及CIAV与ALV-J共感染鸡对疫苗免疫效果的影响

发布时间：2017-04-09 16:20

  本文关键词：四川部分地区CIAV分子流行病学调查及CIAV与ALV-J共感染鸡对疫苗免疫效果的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：鸡传染性贫血(Chicken Infectious Anemia, CIA)是由鸡传染性贫血病毒(Chicken Infectious Anemia Virus, CIAV)引起的雏鸡传染病,是危害养鸡业的一种重要的免疫抑制性疾病。CIAV能引起所有日龄的鸡感染,但本病特征性的临床症状主要见于通过垂直传播被感染的10～14日龄的雏鸡。鸡传染性贫血(CIA)的主要临床特征表现为死亡率增加、体重增重减缓、贫血、骨髓的再生障碍和胸腺萎缩。由CIAV感染导致的重大经济损失常常与严重的免疫抑制或继发感染导致的死亡率增加有关。2013年6月到2014年10月,从四川省的10个市县共15个鸡群采集了138份疑似鸡传染性贫血病病料,利用CIAV特异性引物进行PCR检测。然后从阳性样品中分离CIAV,并对分离毒株的全序列基因组测序分析。最后选择一株代表分离株,感染1日龄SPF雏鸡以观察分离株的致病性。结果显示28.26%(39/138)的样品检测出CIAV,并从检测出CIAV的样品中共分离11株CIAV。全序列基因组同源性分析表明,11个分离株的全序列基因组核苷酸同源性为98.1%～99.7%,与参考毒株的核苷酸同源性为96.2%～98.5%。VP1蛋白氨基酸同源性分析表明,这11株当地流行毒株VP1蛋白氨基酸序列同源性为99.1%-100%,与参考毒株的同源性为96.9%-99.3%。遗传进化分析结果显示,11个分离株同时处在一个分支上,且与美国分离株Del Ross株亲缘性最近。分离株致病性研究结果显示,所有的SPF雏鸡在感染CIAV 15天后均表现出了不同程度的贫血,胸腺和骨髓萎缩,脾脏肿大。本实验利用CIAV四川分离株CIAV-MZ株同ALV-J共感染1日龄雏鸡,研究了两种病毒混合感染对IB和ND疫苗的免疫效果以及对各自致病性的影响。ALV-J的存在加剧了CIAV感染所导致的贫血程度,在感染的第15天表现出了重度的贫血。同时,ALV-J的共感染也延长了鸡只从贫血状态恢复的时间,在感染病毒40天后依旧表现出一定程度的贫血。尽管ALV-J在免疫IB疫苗后的前1-2周可以诱导机体产生较高水平的抗体滴度,但CIAV的共存能明显减弱ALV-J的这种能力,并加快IB抗体滴度在疫苗免疫后期从较高水平下降。CIAV的单独感染在免疫ND疫苗后对HI抗体效价的生成影响不大,ALV-J的单独感染则在免疫ND疫苗后的第四周抗体效价出现明显下降,而CIAV与ALV-J的共感染则会导致抗ND的HI抗体效价下降时间提前。通过实验发现,CIAV与ALV-J共感染也会相互作用增强致病性。其中,同时感染CIAV和ALV-J的鸡只表现出了严重的胸腺萎缩,并出现了腺胃乳头出血、心肌出血、肠道和胰腺出血等复杂的临床症状。综上结果表明,CIAV与ALV-J的共感染在免疫抑制上存在协同作用,而且能相互增强致病性。
【关键词】：鸡传染性贫血病毒 分子流行病学 J亚群禽白血病病毒 致病性
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S858.31
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 英文缩略词对照表8-13
• 第一部分 文献综述13-24
• 1 概论13-24
• 1.1 发生史13-14
• 1.2 病原学14-16
• 1.2.1 病原分类14
• 1.2.2 化学组成14-15
• 1.2.3 理化特性15
• 1.2.4 生物学特性15-16
• 1.3 基因组结构16
• 1.4 病毒蛋白16-18
• 1.5 临床症状18
• 1.6 病理变化18-19
• 1.7 病毒的分离和鉴定19-20
• 1.7.1 病毒的分离19-20
• 1.7.2 病毒的鉴定20
• 1.8 流行特征20-22
• 1.8.1 易感动物和宿主范围20-21
• 1.8.2 传播方式21
• 1.8.3 继发感染21-22
• 1.9 研究目的和意义22-24
• 第二部分 实验内容24-52
• 实验一 四川部分地区CIAV分子流行病学调查24-40
• 1 材料24-26
• 1.1 鸡胚和鸡24
• 1.2 病料24
• 1.3 主要仪器24
• 1.4 主要试剂和试剂盒24-25
• 1.5 试剂的配制25
• 1.6 引物的设计25-26
• 2 方法26-31
• 2.1 病料的采集和处理26
• 2.2 样品上清液总DNA的提取26
• 2.3 常规PCR检测CIAV26-27
• 2.4 CIAV的分离和鉴定27-28
• 2.4.1 样品的采集和处理27
• 2.4.2 CIAV的分离27-28
• 2.5 CIAV分离株全序列基因组的测定28-31
• 2.5.1 CIAV分离株DNA的提取28
• 2.5.2 全序列基因组的分段扩增28-29
• 2.5.3 PCR产物的回收和纯化29
• 2.5.4 目的片段的T-A克隆29
• 2.5.5 重组克隆质粒的转化29-30
• 2.5.6 重组质粒的筛选和鉴定30
• 2.5.7 CIAV分离株全序列基因组的分析30-31
• 2.6 CIAV分离株致病性研究31
• 3 结果31-37
• 3.1 病料PCR检测31-32
• 3.2 CIAV分离毒株全序列基因组扩增32-33
• 3.3 全序列基因组比对分析33-36
• 3.4 当地流行毒株与参考毒株VP1蛋白氨基酸序列比对分析36-37
• 3.5 CIAV分离毒株致病性研究37
• 4 讨论37-40
• 实验二 CIAV与ALV-J共感染鸡对疫苗免疫效果的影响40-52
• 1 材料40
• 1.1 鸡胚和鸡40
• 1.2 毒株和疫苗40
• 1.3 常用试剂40
• 1.4 试剂的配制40
• 2 方法40-42
• 2.1 CIAV分离株SC-MZ株EID50的测定40-41
• 2.2 动物感染实验的设计41
• 2.3 红细胞压积值和体重指数的检测41
• 2.3.1 红细胞压积值(PCV)的测定41
• 2.3.2 体重指数的检测41
• 2.4 IB和ND抗体滴度的测定41-42
• 2.5 脾脏和法氏囊指数的测定42
• 2.6 观察临床症状并制备病理切片42
• 3 结果42-49
• 3.1 EID50的测定42
• 3.2 红细胞压积值和体质量的测定42-44
• 3.2.1 红细胞压积值(PCV)测定42-43
• 3.2.2 体质量的测定43-44
• 3.3 IB-ND抗体滴度的测定44-46
• 3.3.1 间接ELISA法检测IB抗体滴度44-45
• 3.3.2 ND抗体效价检测45-46
• 3.4 脾脏和法氏囊指数的测定46-47
• 3.5 临床症状及病理变化47-49
• 3.5.1 临床症状47
• 3.5.2 病理变化47-49
• 4 讨论49-52
• 结论52-53
• 参考文献53-61
• 致谢61

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