EGF与IGF-1对牦牛卵丘细胞自噬及胞吞相关蛋白表达的影响
发布时间：2021-04-17 04:53
细胞自噬和胞吞是细胞进行正常生命活动所必须的生理程序,其活性受到诸多因素的影响。生长因子作为哺乳动物体内的重要调节因子,可通过多种作用方式参与动物的卵泡发育、卵母细胞成熟及早期胚胎发育,但其对哺乳动物生殖相关细胞自噬及胞吞程序调控的相关研究目前仍十分少见。牦牛（Bos grunniens）作为高原地区重要经济畜种,其季节性发情、繁殖力低下的特征是牧区经济发展困难的主要原因之一,卵丘细胞紧紧围绕卵母细胞生长,它自身的自噬和胞吞活动对卵泡发育及卵母细胞成熟具有重要作用。本研究选取牦牛卵丘细胞为研究对象,探究表皮生长因子（Epidermal gr owth factor,EGF）和胰岛素样生长因子-1（Insulin-like growth factor,IGF-1）对其自噬和胞吞活动的影响。使用浓度为0（对照组）、50、100、150、200 ng/mL的EGF和适宜浓度（10μmol/L）表皮生长因子受体（Epidermal growth factor receptor,EGFR）抑制剂Gefitinib以及浓度为0（对照组）、50、100、150、200 ng/mL的IGF-1作用于牦...
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
第二代牦牛卵丘细胞的生长形态(10×)
甘肃农业大学2020届硕士学位论文18图1第二代牦牛卵丘细胞的生长形态(10×)Fig.1Growthpatternofthesecondgenerationyakcumuluscells(10×)2.2自噬相关蛋白Atg5、Beclin1、LC3在牦牛卵丘细胞中的分布免疫荧光结果显示，Atg5、Beclin1、LC3蛋白在正常生长的牦牛卵丘细胞中均有表达，且主要在细胞质表达，细胞核表达极弱。图2细胞自噬相关蛋白在牦牛卵丘细胞的定位Fig.2Localizationofautophagy-associatedproteinsinyakcumuluscells红色荧光为Atg5、Beclin1、LC3蛋白，蓝色荧光为细胞核Redfluorescence:Atg5,Beclin1,LC3proteinrespectively;Bluefluorescence:cellnucleus2.3胞吞相关蛋白Cav1、Cav2在牦牛卵丘细胞中的分布免疫荧光结果显示，Cav1、Cav2蛋白在正常生长的牦牛卵丘细胞中均有表达，细胞胞膜和胞质均有分布，且细胞核表达极弱。
EGF与IGF-1对牦牛卵丘细胞自噬及胞吞相关蛋白表达的影响19图3细胞胞吞相关蛋白在牦牛卵丘细胞的定位Fig.3Localizationofendocytosis-associatedproteinsinyakcumuluscells红色荧光为Cav1和Cav2蛋白，蓝色荧光为细胞核Redfluorescence:Cav1andCav2proteinrespectively;Bluefluorescence:cellnucleus3讨论本试验成功从牦牛卵巢中分离培养出原代牦牛卵丘细胞，为了试验数据更加可靠有说服力，选取原代或第二代卵丘细胞进行后续试验。故按温度梯度冻存多余的细胞，置于液氮中以备使用。原代培养及传代后的细胞均大小均匀，边缘清晰、生长状态良好，细胞质量得以保证，可以作为试验材料。使用间接免疫荧光法检测自噬及胞吞相关蛋白在牦牛卵丘细胞中的分布，结果显示Atg5、Beclin1、LC3、Cav1、Cav2蛋白在细胞中均有表达，其中自噬相关蛋白Atg5、Beclin1、LC3主要在细胞质表达，说明在一般条件培养下的牦牛卵丘细胞内也存在着一定水平的自噬活动，低水平的自噬可以帮助其分解体内的代谢产物以供循环使用，促进细胞生长；小窝蛋白可在小窝内陷形成胞吞小泡后随小泡进入胞质，胞吞蛋白Cav1、Cav2在质膜和胞质均有表达说明牦牛卵丘细胞中存在依赖于Cav1、Cav2蛋白的细胞内吞作用，细胞通过这种方式进行物质运输和信号转导。一定强度的自噬和胞吞可以帮助细胞维持胞内稳态，促进其生长。4小结正常生长的牦牛卵丘细胞内检测到自噬和胞吞相关蛋白的表达，表达部位符合其功能特点。说明牦牛卵丘细胞存在一定强度的自噬和胞吞作用，帮助细胞维持稳态促
【参考文献】：
期刊论文
[1]WNT2在绵羊卵泡颗粒细胞的表达及功能研究[J]. 薛丽娜,毕锡麟,王锴,党文庆,韩琦,罗惠娣,曹宁贤,吕丽华. 畜牧兽医学报. 2020(01)
[2]牦牛养殖现状、存在问题及发展对策[J]. 才仁巴桑. 畜牧兽医科学(电子版). 2019(22)
[3]miRNA调控哺乳动物卵泡发育和卵母细胞成熟的研究进展[J]. 贺小云,刘秋月,储明星. 畜牧兽医学报. 2019(11)
[4]沉默表皮生长因子受体的表达对肺腺癌A549细胞自噬的影响[J]. 马阳,吴娟,纪晓坤,王蕊,杜芸,王珩,郭晓,张艳. 癌变·畸变·突变. 2019(05)
[5]卵丘细胞对猪卵母细胞成熟及发育的影响[J]. 王庆凯,崔茂盛,杨凌,赵子墨,付永利,张丹,唐佩娟,李千军. 中国畜牧杂志. 2019(08)
[6]牦牛Atg5基因克隆及其在输卵管、卵巢和子宫中的表达定位[J]. 王靖雷,潘阳阳,马睿,王萌,崔燕,余四九. 兽类学报. 2019(05)
[7]抑制泛素结合酶改变猪卵母细胞透明带泛素化状态及精-卵结合能力[J]. 徐妲,王洋,玄彪,汪秋月,徐曼,陈璇,金一. 畜牧兽医学报. 2019(03)
[8]FSH对牦牛卵母细胞EGF、EGFR表达及其细胞凋亡的影响[J]. 何翃闳,潘阳阳,张慧珠,李秦,王萌,崔燕,樊江峰,余四九. 畜牧兽医学报. 2018(09)
[9]基于RNA-Seq技术的牦牛体外受精胚胎发育转录组分析[J]. 字向东,罗斌,夏威,郑玉才,熊显荣,李键,钟金城,朱江江,张正帆. 中国农业科学. 2018(08)
[10]AMH在雌性动物繁殖领域中的研究与应用[J]. 李赞,乔同,姜婷婷,牛凯峰,王贵强,秦则平,杨利国,梁爱心. 中国奶牛. 2018(04)
博士论文
[1]氟化钠对猪卵母细胞减数分裂成熟的影响及机制研究[D]. 刘晓妍.华中农业大学 2018
[2]激素—生长因子—黏附因子调节系统在牦牛子宫内膜上皮的相关性研究[D]. 蒋佳颖.甘肃农业大学 2018
[3]CAV1和JAK在原始卵泡形成中的功能与机制研究[D]. 黄堃.中国农业大学 2018
[4]褪黑素对猪卵泡发育与闭锁的影响研究[D]. 贺亚媚.西北农林科技大学 2017
[5]雌激素受体调控哺乳动物卵母细胞第一次减数分裂进程的研究[D]. 刘伟.中国农业大学 2016
[6]生长因子提高牦牛IVF、SCNT胚胎发育和卵母细胞冷冻适应性的机制研究[D]. 潘阳阳.甘肃农业大学 2016
[7]巴美肉羊发情期血清生殖激素和卵巢microRNAs的鉴定及功能分析[D]. 祁云霞.内蒙古农业大学 2013
[8]AY9944 A-7对绵羊卵母细胞体外成熟以及孤雌胚胎早期发育能力的影响[D]. 郝瑞荣.山西农业大学 2013
[9]表皮生长因子（EGF）介导的MAPK/PI3K/PLC-γ1信号通路关键信号蛋白活性研究[D]. 史怀平.西北农林科技大学 2011
[10]猪卵泡闭锁的特征与miRNA调控研究[D]. 林飞.南京农业大学 2011
硕士论文
[1]虎杖苷对牛卵母细胞体外成熟的影响[D]. 李小凤.广西大学 2019
[2]E2与FSH对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞增殖和凋亡的影响[D]. 文冬梅.广西大学 2019
[3]MEX3C调控IGF-1R促进小鼠颗粒细胞体外增殖的机制研究[D]. 何艳桃.宁夏医科大学 2019
[4]水牛卵丘细胞主要能量供给途径及葡萄糖对其生长特性影响的初探[D]. 尹倩.广西大学 2017
[5]CREBZF/Zhangfei在小鼠卵巢颗粒细胞凋亡调控中的作用[D]. 温鑫.西北农林科技大学 2017
[6]下调Dlg1对猪卵母细胞体外发育的影响[D]. 李科瑛.西北农林科技大学 2017
[7]褪黑素对牛卵泡内膜细胞凋亡和类固醇生成的作用研究[D]. 王晓梅.西北农林科技大学 2017
[8]基于单细胞测序的卵丘颗粒细胞中CCND1和CCND2对牦牛卵母细胞发育影响的研究[D]. 石仙.西南民族大学 2017
[9]BMP15通过FAT1调控猪卵丘细胞凋亡及其关键分子通路分析[D]. 吴心慧.吉林大学 2016
[10]C型钠肽对牛腔前卵泡体外生长发育作用的研究[D]. 原敏.西北农林科技大学 2016
本文编号：3142847
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
第二代牦牛卵丘细胞的生长形态(10×)
甘肃农业大学2020届硕士学位论文18图1第二代牦牛卵丘细胞的生长形态(10×)Fig.1Growthpatternofthesecondgenerationyakcumuluscells(10×)2.2自噬相关蛋白Atg5、Beclin1、LC3在牦牛卵丘细胞中的分布免疫荧光结果显示，Atg5、Beclin1、LC3蛋白在正常生长的牦牛卵丘细胞中均有表达，且主要在细胞质表达，细胞核表达极弱。图2细胞自噬相关蛋白在牦牛卵丘细胞的定位Fig.2Localizationofautophagy-associatedproteinsinyakcumuluscells红色荧光为Atg5、Beclin1、LC3蛋白，蓝色荧光为细胞核Redfluorescence:Atg5,Beclin1,LC3proteinrespectively;Bluefluorescence:cellnucleus2.3胞吞相关蛋白Cav1、Cav2在牦牛卵丘细胞中的分布免疫荧光结果显示，Cav1、Cav2蛋白在正常生长的牦牛卵丘细胞中均有表达，细胞胞膜和胞质均有分布，且细胞核表达极弱。
EGF与IGF-1对牦牛卵丘细胞自噬及胞吞相关蛋白表达的影响19图3细胞胞吞相关蛋白在牦牛卵丘细胞的定位Fig.3Localizationofendocytosis-associatedproteinsinyakcumuluscells红色荧光为Cav1和Cav2蛋白，蓝色荧光为细胞核Redfluorescence:Cav1andCav2proteinrespectively;Bluefluorescence:cellnucleus3讨论本试验成功从牦牛卵巢中分离培养出原代牦牛卵丘细胞，为了试验数据更加可靠有说服力，选取原代或第二代卵丘细胞进行后续试验。故按温度梯度冻存多余的细胞，置于液氮中以备使用。原代培养及传代后的细胞均大小均匀，边缘清晰、生长状态良好，细胞质量得以保证，可以作为试验材料。使用间接免疫荧光法检测自噬及胞吞相关蛋白在牦牛卵丘细胞中的分布，结果显示Atg5、Beclin1、LC3、Cav1、Cav2蛋白在细胞中均有表达，其中自噬相关蛋白Atg5、Beclin1、LC3主要在细胞质表达，说明在一般条件培养下的牦牛卵丘细胞内也存在着一定水平的自噬活动，低水平的自噬可以帮助其分解体内的代谢产物以供循环使用，促进细胞生长；小窝蛋白可在小窝内陷形成胞吞小泡后随小泡进入胞质，胞吞蛋白Cav1、Cav2在质膜和胞质均有表达说明牦牛卵丘细胞中存在依赖于Cav1、Cav2蛋白的细胞内吞作用，细胞通过这种方式进行物质运输和信号转导。一定强度的自噬和胞吞可以帮助细胞维持胞内稳态，促进其生长。4小结正常生长的牦牛卵丘细胞内检测到自噬和胞吞相关蛋白的表达，表达部位符合其功能特点。说明牦牛卵丘细胞存在一定强度的自噬和胞吞作用，帮助细胞维持稳态促
【参考文献】：
期刊论文
[1]WNT2在绵羊卵泡颗粒细胞的表达及功能研究[J]. 薛丽娜,毕锡麟,王锴,党文庆,韩琦,罗惠娣,曹宁贤,吕丽华. 畜牧兽医学报. 2020(01)
[2]牦牛养殖现状、存在问题及发展对策[J]. 才仁巴桑. 畜牧兽医科学(电子版). 2019(22)
[3]miRNA调控哺乳动物卵泡发育和卵母细胞成熟的研究进展[J]. 贺小云,刘秋月,储明星. 畜牧兽医学报. 2019(11)
[4]沉默表皮生长因子受体的表达对肺腺癌A549细胞自噬的影响[J]. 马阳,吴娟,纪晓坤,王蕊,杜芸,王珩,郭晓,张艳. 癌变·畸变·突变. 2019(05)
[5]卵丘细胞对猪卵母细胞成熟及发育的影响[J]. 王庆凯,崔茂盛,杨凌,赵子墨,付永利,张丹,唐佩娟,李千军. 中国畜牧杂志. 2019(08)
[6]牦牛Atg5基因克隆及其在输卵管、卵巢和子宫中的表达定位[J]. 王靖雷,潘阳阳,马睿,王萌,崔燕,余四九. 兽类学报. 2019(05)
[7]抑制泛素结合酶改变猪卵母细胞透明带泛素化状态及精-卵结合能力[J]. 徐妲,王洋,玄彪,汪秋月,徐曼,陈璇,金一. 畜牧兽医学报. 2019(03)
[8]FSH对牦牛卵母细胞EGF、EGFR表达及其细胞凋亡的影响[J]. 何翃闳,潘阳阳,张慧珠,李秦,王萌,崔燕,樊江峰,余四九. 畜牧兽医学报. 2018(09)
[9]基于RNA-Seq技术的牦牛体外受精胚胎发育转录组分析[J]. 字向东,罗斌,夏威,郑玉才,熊显荣,李键,钟金城,朱江江,张正帆. 中国农业科学. 2018(08)
[10]AMH在雌性动物繁殖领域中的研究与应用[J]. 李赞,乔同,姜婷婷,牛凯峰,王贵强,秦则平,杨利国,梁爱心. 中国奶牛. 2018(04)
博士论文
[1]氟化钠对猪卵母细胞减数分裂成熟的影响及机制研究[D]. 刘晓妍.华中农业大学 2018
[2]激素—生长因子—黏附因子调节系统在牦牛子宫内膜上皮的相关性研究[D]. 蒋佳颖.甘肃农业大学 2018
[3]CAV1和JAK在原始卵泡形成中的功能与机制研究[D]. 黄堃.中国农业大学 2018
[4]褪黑素对猪卵泡发育与闭锁的影响研究[D]. 贺亚媚.西北农林科技大学 2017
[5]雌激素受体调控哺乳动物卵母细胞第一次减数分裂进程的研究[D]. 刘伟.中国农业大学 2016
[6]生长因子提高牦牛IVF、SCNT胚胎发育和卵母细胞冷冻适应性的机制研究[D]. 潘阳阳.甘肃农业大学 2016
[7]巴美肉羊发情期血清生殖激素和卵巢microRNAs的鉴定及功能分析[D]. 祁云霞.内蒙古农业大学 2013
[8]AY9944 A-7对绵羊卵母细胞体外成熟以及孤雌胚胎早期发育能力的影响[D]. 郝瑞荣.山西农业大学 2013
[9]表皮生长因子（EGF）介导的MAPK/PI3K/PLC-γ1信号通路关键信号蛋白活性研究[D]. 史怀平.西北农林科技大学 2011
[10]猪卵泡闭锁的特征与miRNA调控研究[D]. 林飞.南京农业大学 2011
硕士论文
[1]虎杖苷对牛卵母细胞体外成熟的影响[D]. 李小凤.广西大学 2019
[2]E2与FSH对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞增殖和凋亡的影响[D]. 文冬梅.广西大学 2019
[3]MEX3C调控IGF-1R促进小鼠颗粒细胞体外增殖的机制研究[D]. 何艳桃.宁夏医科大学 2019
[4]水牛卵丘细胞主要能量供给途径及葡萄糖对其生长特性影响的初探[D]. 尹倩.广西大学 2017
[5]CREBZF/Zhangfei在小鼠卵巢颗粒细胞凋亡调控中的作用[D]. 温鑫.西北农林科技大学 2017
[6]下调Dlg1对猪卵母细胞体外发育的影响[D]. 李科瑛.西北农林科技大学 2017
[7]褪黑素对牛卵泡内膜细胞凋亡和类固醇生成的作用研究[D]. 王晓梅.西北农林科技大学 2017
[8]基于单细胞测序的卵丘颗粒细胞中CCND1和CCND2对牦牛卵母细胞发育影响的研究[D]. 石仙.西南民族大学 2017
[9]BMP15通过FAT1调控猪卵丘细胞凋亡及其关键分子通路分析[D]. 吴心慧.吉林大学 2016
[10]C型钠肽对牛腔前卵泡体外生长发育作用的研究[D]. 原敏.西北农林科技大学 2016
本文编号：3142847
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