瓦布贝母抑菌活性菌株的筛选鉴定及其次生代谢产物的初步研究
发布时间：2021-12-09 04:47
植物内生真菌是一类存在于宿主植物组织内,却又不引起植物病害的微生物,它们在长期的共同进化过程中与宿主形成了趋于稳定的互惠共生关系。植物内生真菌是具有高度多样性的微生物资源,能产生多种不同药效价值的次生代谢活性产物,是一类具备良好开发价值的微生物,可作为抗菌、抗氧化及抗癌等天然药物的潜在来源。由于内生真菌具备抗菌活性,有望成为微生物农药制剂的重要来源,这对于农业病虫害的生物防治也将产生重要意义。本文以瓦布贝母内生真菌作为研究对象,对菌株及其次生代谢产物的抑菌活性进行了筛选,并对具有高效广谱抑菌活性的内生真菌菌株进行了菌种鉴定和发酵条件的优化。主要研究结果包括以下几个方面：1、对分离自瓦布贝母鳞茎的50株内生真菌进行了抑菌活性的多重筛选。首先运用菌饼法,将4种指示细菌（革兰氏阳性和革兰氏阴性菌）和1种指示真菌作为指示菌,对50株内生真菌进行了抑菌活性的初筛,其中有41株内生真菌对一种以上指示菌具有抑制作用,占菌株总数的82.00%；有23株内生真菌对三种以上指示菌具有抑制作用,占菌株总数的46.00%。采用双层平板法,将上述试验中对三种以上指示菌具有抑制作用的23株内生真菌进行抑菌活性的复...
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 文献综述
1.1 贝母概述
1.1.1 贝母的活性成分
1.1.2 贝母的药用价值
1.2 植物内生真菌起源及研究进展
1.3 植物内生真菌的多样性
1.3.1 种类多样性
1.3.2 分布多样性
1.3.3 形态多样性
1.3.4 宿主多样性
1.4 内生真菌与宿主植物的关系
1.5 植物内生真菌的次生代谢产物
1.5.1 抗肿瘤活性物质
1.5.2 抗菌活性物质
1.5.3 抗氧化活性物质
1.5.4 生长调节物质
1.6 植物内生真菌的生物学特性和应用价值
1.6.1 促进植物生长发育
1.6.2 增强植物抗性
1.6.3 生物防治
1.6.4 天然药物的新来源
1.7 贝母内生真菌研究进展
2 立题依据
3 材料与方法
3.1 供试材料
3.1.1 内生真菌菌株
3.1.2 供试指示菌
3.1.3 培养基
3.1.3.1 所需培养基
3.1.3.2 培养基成分及配制
3.1.4 主要试剂
3.1.5 主要仪器
3.2 内生真菌的纯培养
3.3 内生真菌的液体培养与发酵产物的处理
3.4 抑菌活性的测定
3.4.1 初筛
3.4.2 复筛
3.4.2.1 双层平板法
3.4.2.2 平皿打孔法
3.4.3 扩大筛选
3.5 生物活性测定
3.5.1 不同提取部位的制备
3.5.2 不同提取部位的抑菌活性测定
3.6 内生真菌的鉴定
3.6.1 形态学鉴定
3.6.2 分子生物学鉴定
3.6.2.1 DNA的提取
3.6.2.2 PCR反应
3.6.2.3 聚类分析
3.7 发酵条件的优化
3.7.1 培养基的优化
3.7.1.1 固体培养基的优化
3.7.1.2 液体培养基的优化
3.7.2 发酵条件的优化
3.7.2.1 最佳接种量的选择
3.7.2.2 最佳培养温度的选择
3.7.2.3 最佳起始pH的选择
3.7.2.4 最佳培养时间的选择
4 结果与分析
4.1 瓦布贝母内生真菌的抑菌活性
4.1.1 菌饼法初筛结果
4.1.2 双层平板法复筛结果
4.1.3 平皿打孔法复筛结果
4.1.4 平皿打孔法扩大病原菌种类筛选结果
4.2 活性菌株不同提取部位的抑菌活性
4.3 活性菌株的分类鉴定
4.3.1 形态鉴定结果
4.3.2 ITS序列分析
4.3.3 活性菌株分类地位
4.4 发酵条件的优化
4.4.1 固体培养基筛选结果
4.4.2 发酵培养基筛选结果
5 结论与讨论
5.1 瓦布贝母内生真菌的抑菌活性
5.2 活性菌株的分类鉴定
5.3 发酵条件的优化
参考文献
致谢
攻读硕士期间发表的论文
专利申请情况
本文编号：3529947
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 文献综述
1.1 贝母概述
1.1.1 贝母的活性成分
1.1.2 贝母的药用价值
1.2 植物内生真菌起源及研究进展
1.3 植物内生真菌的多样性
1.3.1 种类多样性
1.3.2 分布多样性
1.3.3 形态多样性
1.3.4 宿主多样性
1.4 内生真菌与宿主植物的关系
1.5 植物内生真菌的次生代谢产物
1.5.1 抗肿瘤活性物质
1.5.2 抗菌活性物质
1.5.3 抗氧化活性物质
1.5.4 生长调节物质
1.6 植物内生真菌的生物学特性和应用价值
1.6.1 促进植物生长发育
1.6.2 增强植物抗性
1.6.3 生物防治
1.6.4 天然药物的新来源
1.7 贝母内生真菌研究进展
2 立题依据
3 材料与方法
3.1 供试材料
3.1.1 内生真菌菌株
3.1.2 供试指示菌
3.1.3 培养基
3.1.3.1 所需培养基
3.1.3.2 培养基成分及配制
3.1.4 主要试剂
3.1.5 主要仪器
3.2 内生真菌的纯培养
3.3 内生真菌的液体培养与发酵产物的处理
3.4 抑菌活性的测定
3.4.1 初筛
3.4.2 复筛
3.4.2.1 双层平板法
3.4.2.2 平皿打孔法
3.4.3 扩大筛选
3.5 生物活性测定
3.5.1 不同提取部位的制备
3.5.2 不同提取部位的抑菌活性测定
3.6 内生真菌的鉴定
3.6.1 形态学鉴定
3.6.2 分子生物学鉴定
3.6.2.1 DNA的提取
3.6.2.2 PCR反应
3.6.2.3 聚类分析
3.7 发酵条件的优化
3.7.1 培养基的优化
3.7.1.1 固体培养基的优化
3.7.1.2 液体培养基的优化
3.7.2 发酵条件的优化
3.7.2.1 最佳接种量的选择
3.7.2.2 最佳培养温度的选择
3.7.2.3 最佳起始pH的选择
3.7.2.4 最佳培养时间的选择
4 结果与分析
4.1 瓦布贝母内生真菌的抑菌活性
4.1.1 菌饼法初筛结果
4.1.2 双层平板法复筛结果
4.1.3 平皿打孔法复筛结果
4.1.4 平皿打孔法扩大病原菌种类筛选结果
4.2 活性菌株不同提取部位的抑菌活性
4.3 活性菌株的分类鉴定
4.3.1 形态鉴定结果
4.3.2 ITS序列分析
4.3.3 活性菌株分类地位
4.4 发酵条件的优化
4.4.1 固体培养基筛选结果
4.4.2 发酵培养基筛选结果
5 结论与讨论
5.1 瓦布贝母内生真菌的抑菌活性
5.2 活性菌株的分类鉴定
5.3 发酵条件的优化
参考文献
致谢
攻读硕士期间发表的论文
专利申请情况
本文编号：3529947
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