红花CtDof基因的克

发布时间：2021-12-09 11:07

　　红花（Carthamus tinctorius L.）,为菊科红花属草本植物。目前,全世界菊科红花属植物约有25种,而在我国,仅有红花一种。红花具有较强的抗旱和抗寒的能力,主要栽种于我国河南、新疆、四川、浙江等地区。转录因子Dof是植物所特有的一类转录因子,能够响应光的应答,参与代谢调节,从而影响种子的萌发和成熟,还能够参与抗逆反应,提高植物的抗性等,在植物的生长发育过程中发挥着重要的作用。本研究以“吉红一号”红花为实验材料,克隆CtDof基因,对其在不同组织及种子不同发育阶段的表达水平进行分析,同时构建超表达载体转化拟南芥,鉴定其功能。主要研究结果如下:1.在红花不同组织部位之间,红花Dof基因家族中的Unigene100791基因（CtDof1）的相对表达量最高,尤其是在成熟种子中,Unigene100791基因的相对表达量分别是Unigene39146基因的12.2倍,Unigene41817基因的2.2倍,Unigene71654基因的1.8倍,Unigene97057基因的3.9倍;在种子发育16天时Unigene100791基因的相对表达量最高,分别是Unigene3914... 

【文章来源】：长春师范大学吉林省

【文章页数】：90 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
    1.1 红花的简述
        1.1.1 红花的起源与分布
        1.1.2 红花主要的化学成分及药理活性
        1.1.3 红花的应用
    1.2 转录因子的概述
        1.2.1 转录因子的定义
        1.2.2 转录因子的结构特征
        1.2.3 转录因子的生物学功能
    1.3 Dof转录因子的概述
        1.3.1 Dof转录因子的定义
        1.3.2 Dof转录因子的结构特征
        1.3.3 Dof转录因子的生物学功能
    1.4 研究的内容与意义
第2章 红花CtDof基因家族的表达分析
    2.1 前言
    2.2 实验材料、试剂和仪器
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 实验试剂
        2.2.3 实验仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 实时荧光定量PCR引物的设计
        2.3.2 实时荧光定量PCR反应cDNA的制备
        2.3.3 Real-Time PCR反应体系及反应条件
    2.4 结果与分析
        2.4.1 红花CtDof基因荧光定量PCR的扩增效率考察
        2.4.2 在红花不同组织部位的相对表达量
        2.4.3 在红花种子不同发育时期的相对表达量
    2.5 讨论
第3章 红花CtDof1基因的克隆及生物信息学分析
    3.1 前言
    3.2 实验材料、试剂和仪器
        3.2.1 实验材料
        3.2.2 实验试剂
        3.2.3 实验仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 总RNA的提取
        3.3.2 总RNA反转录成cDNA
        3.3.3 红花CtDof1中间片段的克隆
        3.3.4 红花CtDof13’末端的克隆
        3.3.5 红花CtDof1基因的克隆
        3.3.6 红花CtDof1基因的生物信息学分析
    3.4 结果与分析
        3.4.1 红花种子总RNA的检测
        3.4.2 红花CtDof1基因中间片段在红花基因组中的验证
        3.4.3 红花CtDof1基因 3’RACE的克隆
        3.4.4 红花CtDof1基因全长基因的克隆
        3.4.5 红花CtDof1基因及编码蛋白的生物信息学分析
    3.5 讨论
第4章 红花CtDof1基因的功能验证
    4.1 前言
    4.2 实验材料、试剂和仪器
        4.2.1 实验材料
        4.2.2 实验试剂
        4.2.3 实验仪器
    4.3 实验方法
        4.3.1 目的基因引物的设计
        4.3.2 目的基因的克隆
        4.3.3 红花CtDof1基因植物超表达载体的连接
        4.3.4 红花CtDof1基因在植物中的超表达
        4.3.5 CtDof1转基因拟南芥在盐胁迫应答中的功能
    4.4 结果与分析
        4.4.1 红花CtDof1基因植物超表达载体的构建
        4.4.2 红花CtDof1基因在拟南芥中的超表达
        4.4.3 红花CtDof1基因在红花中的超表达
        4.4.4 CtDof1转基因拟南芥在盐胁迫应答中的功能
    4.5 讨论
第5章 红花CtDof1基因原核表达载体的构建及诱导分析
    5.1 前言
    5.2 实验材料、试剂和仪器
        5.2.1 实验材料
        5.2.2 实验试剂
        5.2.3 实验仪器
    5.3 实验方法
        5.3.1 目的基因引物的设计
        5.3.2 红花CtDof1基因原核表达载体的构建
        5.3.3 红花CtDof1基因的诱导表达
        5.3.4 诱导表达的产物检测
    5.4 结果与分析
    5.5 讨论
结论
参考文献
作者在攻读硕士学位期间主要研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]巴西橡胶树HbMYB52基因的克隆及其在拟南芥中的表达[J]. 仇键,刘彤,王帆,魏芳,高宏华,杨文凤,吴明,罗世巧,校现周.  热带亚热带植物学报. 2016(06)
[2]番茄NP24基因超表达载体的构建[J]. 赵敬一,张喜春.  中国农学通报. 2016(16)
[3]胡萝卜中DcDofD1转录因子的克隆及其对非生物逆境胁迫的响应分析[J]. 却枫,黄莹,王枫,徐志胜,王广龙,熊爱生.  植物遗传资源学报. 2015(05)
[4]马铃薯基因组中Dof转录因子家族的鉴定与表达特征分析[J]. 吴智明,张圣旭,梁关生.  核农学报. 2015(07)
[5]盐胁迫对植物的影响及植物对盐胁迫的适应性[J]. 韩志平,张海霞,周凤.  山西大同大学学报(自然科学版). 2015(03)
[6]调控植物类黄酮生物合成的MYB转录因子研究进展[J]. 邢文,金晓玲.  分子植物育种. 2015(03)
[7]几种新型植物基因表达载体的构建方法[J]. 张阳璞,杨淑慎.  生物工程学报. 2015(03)
[8]红花药理作用及其开发与应用研究进展[J]. 易善勇,官丽莉,杨晶,李海燕,李校堃,姜潮,黄建.  北方园艺. 2015(05)
[9]WRKY转录因子在植物生长发育中的调控作用[J]. 张婷婷,田云,卢向阳.  化学与生物工程. 2014(08)
[10]植物花青素合成代谢途径及其分子调控[J]. 贾赵东,马佩勇,边小峰,杨清,郭小丁,谢一芝.  西北植物学报. 2014(07)

博士论文
[1]泥蚶高通量转录组分析及生长相关基因的克隆与表达研究[D]. 董迎辉.中国海洋大学 2012

硕士论文
[1]红花黄色素生物合成转录因子基因CtMYB1的克隆、表达分析及功能初步研究[D]. 张雪.吉林农业大学 2015
[2]云南红梨果皮转录因子MYB、bHLH和WD40互作及调控果皮着色机理研究[D]. 崔道雷.昆明理工大学 2013
[3]人肌红蛋白基因合成、原核表达及单克隆抗体制备[D]. 安星兰.东北林业大学 2012
[4]ERF转录因子LeERF2、JERF2在非生物胁迫应答中的功能分析[D]. 张执金.中国农业科学院 2004



本文编号：3530529