蜂王浆主蛋白1多克隆抗体的纯化方法与其一级结构表征
发布时间：2023-05-06 17:52
在蜂王浆中发挥免疫调节功能的主要成分是蛋白质,特别是作为主要糖蛋白的蜂王浆主蛋白1(MRJP1)。MRJP1被认为是蜂王浆过敏的主导蛋白,对蜂王浆过敏的人可能患有急性哮喘、接触性皮炎、过敏反应,严重情况下会导致死亡。有研究发现,糖蛋白的许多生理功能是在糖链的共同参与下完成的,甚至糖链的作用更直接、更突出,并且影响糖蛋白的构象。为了进一步探讨糖链的作用,本研究在不切除糖链的情况下,利用天然MRJP1制备多克隆抗体具有重要意义。本论文的主要目的在于寻找有效的方法从多克隆抗体中纯化出特异性更强的抗体IgG,并建立计算机检索与人工手动检索相结合分析抗体一级结构的方法,初步表征多克隆抗体,为MRJP1多克隆抗体后续在体外诊断试剂和治疗疾病药物开发方面的应用研究提供基础数据。主要研究结果如下:(1)MRJP1的提取与兔多克隆抗体制备:对MRJPs进行超速离心,得到三层不同的溶液,UMRJPs中主要存在MRJP2和MRJP3;MMRJPs观察到MRJP1、MRJP2和MRJP3均存在;LMRJPs的电泳结果显示其主要为MRJP1,含量占比约为92.95%。利用分离得到的MRJP1进行新西兰大白兔免疫...
【文章页数】：101 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
缩写、符号清单、术语表
1 绪论
1.1 蜂王浆主蛋白1的致敏性
1.2 多克隆抗体研究现状
1.2.1 多克隆抗体
1.2.2 多克隆抗体纯化
1.3 MRJP1 的抗体研究
1.4 研究意义与内容
1.4.1 研究意义
1.4.2 研究内容
1.5 研究技术路线
2 蜂王浆主蛋白1的多克隆抗体的制备及纯化
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 实验材料
2.2.2 实验试剂
2.2.3 实验设备
2.3 实验方法
2.3.1 MRJP1、MRJP2和MRJP3 的蛋白同源性分析
2.3.2 蜂王浆主蛋白1(MRJP1)的纯化
2.3.3 MRJP1的SDS-PAGE验证
2.3.4 MRJP1 多克隆抗体的制备
2.3.5 多克隆抗体效价的测定
2.3.6 多克隆抗体的纯化
2.3.7 抗体纯化后的SDS-PAGE及 Native-PAGE验证
2.3.8 数据分析处理
2.4 实验结果与讨论
2.4.1 MRJP1、MRJP2和MRJP3 的蛋白同源性分析
2.4.2 MRJP1的SDS-PAGE的结果分析
2.4.3 MRJP1 抗体效价
2.4.4 抗体纯化后的电泳结果分析
2.5 本章小结
3 MRJP1 多克隆抗体纯化及其特异性鉴定
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 实验材料
3.2.2 实验试剂
3.2.3 实验设备
3.3 实验方法
3.3.1 等电点聚焦电泳
3.3.2 切胶纯化
3.3.3 制备电泳分离MRJP1、MRJP2和MRJP3
3.3.4 各组分的特异性验证
3.3.5 数据分析处理
3.4 实验结果与讨论
3.4.1 等电点聚焦电泳测定结果
3.4.2 切胶纯化组分的SDS-PAGE验证
3.4.3 制备电泳分离结果验证
3.4.4 各组分的特异性验证结果
3.5 本章小结
4 抗体的一级结构鉴定
4.1 引言
4.2 实验材料
4.2.1 实验材料
4.2.2 实验试剂
4.2.3 实验设备
4.3 实验方法
4.3.1 蛋白胶内酶切
4.3.2 LC-MS/MS分析
4.3.3 数据库检索分析与结果
4.3.4 De novo检索分析方法
4.3.5 肽段二级质谱b离子和y离子理论值质荷比搜索
4.4 实验结果与讨论
4.4.1 重链一级结构
4.4.2 轻链一级结构
4.5 本章小结
5 结论与展望
5.1 结论
5.2 创新点
5.3 展望
参考文献
附录
附录一:Peaks Studio搜库结果
后记
本文编号：3809352
【文章页数】：101 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
缩写、符号清单、术语表
1 绪论
1.1 蜂王浆主蛋白1的致敏性
1.2 多克隆抗体研究现状
1.2.1 多克隆抗体
1.2.2 多克隆抗体纯化
1.3 MRJP1 的抗体研究
1.4 研究意义与内容
1.4.1 研究意义
1.4.2 研究内容
1.5 研究技术路线
2 蜂王浆主蛋白1的多克隆抗体的制备及纯化
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 实验材料
2.2.2 实验试剂
2.2.3 实验设备
2.3 实验方法
2.3.1 MRJP1、MRJP2和MRJP3 的蛋白同源性分析
2.3.2 蜂王浆主蛋白1(MRJP1)的纯化
2.3.3 MRJP1的SDS-PAGE验证
2.3.4 MRJP1 多克隆抗体的制备
2.3.5 多克隆抗体效价的测定
2.3.6 多克隆抗体的纯化
2.3.7 抗体纯化后的SDS-PAGE及 Native-PAGE验证
2.3.8 数据分析处理
2.4 实验结果与讨论
2.4.1 MRJP1、MRJP2和MRJP3 的蛋白同源性分析
2.4.2 MRJP1的SDS-PAGE的结果分析
2.4.3 MRJP1 抗体效价
2.4.4 抗体纯化后的电泳结果分析
2.5 本章小结
3 MRJP1 多克隆抗体纯化及其特异性鉴定
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 实验材料
3.2.2 实验试剂
3.2.3 实验设备
3.3 实验方法
3.3.1 等电点聚焦电泳
3.3.2 切胶纯化
3.3.3 制备电泳分离MRJP1、MRJP2和MRJP3
3.3.4 各组分的特异性验证
3.3.5 数据分析处理
3.4 实验结果与讨论
3.4.1 等电点聚焦电泳测定结果
3.4.2 切胶纯化组分的SDS-PAGE验证
3.4.3 制备电泳分离结果验证
3.4.4 各组分的特异性验证结果
3.5 本章小结
4 抗体的一级结构鉴定
4.1 引言
4.2 实验材料
4.2.1 实验材料
4.2.2 实验试剂
4.2.3 实验设备
4.3 实验方法
4.3.1 蛋白胶内酶切
4.3.2 LC-MS/MS分析
4.3.3 数据库检索分析与结果
4.3.4 De novo检索分析方法
4.3.5 肽段二级质谱b离子和y离子理论值质荷比搜索
4.4 实验结果与讨论
4.4.1 重链一级结构
4.4.2 轻链一级结构
4.5 本章小结
5 结论与展望
5.1 结论
5.2 创新点
5.3 展望
参考文献
附录
附录一:Peaks Studio搜库结果
后记
本文编号：3809352
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/zaizhiyanjiusheng/3809352.html
