中国荷斯坦奶牛HSP70-1基因多态性与耐热性能相关性分析

发布时间：2017-05-23 09:18

  本文关键词：中国荷斯坦奶牛HSP70-1基因多态性与耐热性能相关性分析，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：热应激对奶牛的健康造成巨大伤害,并且降低奶牛生产性能,给生产带来严重损失。热应激蛋白70(HSP70)作为分子伴侣,在奶牛发生热应激时能保护机体免受或减轻伤害。本文以温湿指数(THI)作为参照指标,比较中国荷斯坦奶牛热应激期和非热应激期生理常数、血液生化指标及生产性能变化。采用PCR-SSCP检测HSP70-1基因单核苷酸多态性,使用Western-blot方法检测奶牛热应激时淋巴细胞HSP70蛋白表达水平。通过SPSS软件对SNPs与HSP70表达水平、生理常数、血清生化指标及生产性能进行关联分析。实验一。从福建长富某牛场核心群随机选择458头中国荷斯坦泌乳牛进行实验,分别于非热应激期(2013年11月至2014年1月)和热应激期(2014年7月至9月)期间,测定牛舍温湿指数(THI)、奶牛生理常数、血清生化指标及生产性能。结果表明：处于中度热应激时,奶牛直肠温显著升高(P0.05),呼吸频率极显著加快(P0.01)；血清T4和Cor浓度分别下降23.80%(P0.01)和36.20%(P0.01),血清T3和INS浓度下降,但差异均不显著(P0.05)；血清Glu下降25.50%(P0.01),血清BUN浓度升高32.14%(P0.01),血清TG浓度没有显著变化；产奶量、乳蛋白率和乳脂率分别下降了17.75%(P0.05)、5%(P0.05)和23%(P0.01)。实验二。采用PCR-SSCP疗法,检测458头处于泌乳期中国荷斯坦奶牛的HSP70-1基因单核苷酸多态性,与耐性能进行关联分析。根据CNKI登录号为AY149619的HSP70-1基因,使用primer 5.0设计12对引物。结果发现：在HSP70-1基因1112位点发生了C-A突变,有AA、AB及BB 3种基因型；3390位点发生T-C突变,有CC、CD及DD 3种基因型；4583位点发生T-C突变,有EE和EF 2种基因型；5886位点A碱基缺失,有HH和HI 2种基因型。采用Western-blot结合光密度分析检测奶牛HSP70表达水平。使用SPSS软件建立一般线性模型,对SNPs与生理常数、血清生化指标、HSP70表达水平及生产性能进行关联分析。结果表明：C1112A位点与HSP70表达水平、直肠温度、产奶量、体细胞数显著相关。其中：AB及AA型个体直肠温度显著低于BB型个体(P0.05)；AB型个体血清T3浓度显著低于AA和BB个体(P0.05),T4浓度显著低于BB个体(P0.05)低于AA个体,但差异不显著(P0.05)；AB型个体HSP70蛋白表达量显著高于AA、BB型个体(P0.05)；AB型个体热应期产奶量显著高于AA、BB型个体(P0.05),分别高了9%和13%；AB型个体乳体细胞数显著低于AA和BB型个体(P0.05)。T3390C位点与乳脂率显著相关(P0.05),其中DD型个体显著高于CC型和CD型个体(P0.05)。其他位点与生产性能均不相关。可见,AB型为耐热基因型,可作为奶牛耐热基因的分子遗传参考标记。
【关键词】：热应激 血液生化 PCR-SSCP HSP70 Western-blot
【学位授予单位】：福建农林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S823
【目录】：

• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 第一章 文献综述11-19
• 引言11
• 1 热应激对奶牛的影响11-15
• 1.1 热应激的评定标准11
• 1.2 热应激对奶牛生产性能的影响11-14
• 1.3 热应激对血液生化指标的影响14
• 1.4 热应激对奶牛的损伤14-15
• 2 缓解热应激的措施15-16
• 2.1 改进场地建设及科学管理饲养15
• 2.2 营养调控缓解奶牛热应激15-16
• 2.3 抗热基因筛选16
• 3 HSP70蛋白研究进展16-17
• 3.1 HSP70蛋白生物学功能16-17
• 4 HSP70-1基因多态性研究进展17-18
• 4.117-18
• 4.1.1 PCR-SSCP在单核苷酸多态性(SNP)中的应用17-18
• 4.1.2 PCR-SCCP的工作原理18
• 4.2 HSP70-1 SNP位点与牛奶热应激相关性状研究进展18
• 5 本研究的目的和意义18-19
• 第二章 实验部分19-47
• 实验一 热应激对中国荷斯坦奶牛生理、血清生化指标及生产性能影响19-25
• 1 实验材料及方法19-20
• 1.1 实验材料19
• 1.2 实验方法19-20
• 1.3 数据处理20
• 2 实验结果与分析20-22
• 2.1 热应激对奶牛生理常数影响20-21
• 2.2 热应激对血清生化指标影响21
• 2.3 热应激对产奶量影响21-22
• 2.4 热应激对乳成分影响22
• 3 讨论22-24
• 3.1 热应激对生理指标影响22
• 3.2 热应激对血清生化指标影响22-23
• 3.3 热应激对产奶量及乳成分影响23-24
• 4 小结24-25
• 实验二 HSP70-1基因SNP位点与耐热指标关联性分析25-47
• 1 实验材料及方法25-29
• 1.125-26
• 1.2 实验方法26-27
• 1.3 HSP70-1多态位点检测27-29
• 2 淋巴细胞HSP70蛋白表达测定29-31
• 3 结果统计31-32
• 3.1 基因频率、基因型频率计算31
• 3.2 哈代-温伯格平衡检测(Hardy-Weinberg)31
• 3.3 群体遗传多态性31-32
• 3.4 建立分析模型及数据统计32
• 4 结果与分析32-45
• 4.1 HSP70-1基因多态位点检测32-37
• 4.2 SNPs与生理常数关联分析37-38
• 4.3 SNPs与血清生化指标关联分析38-40
• 4.4 SNPs与淋巴细胞HSP70表达关联分析40-42
• 4.5 SNPs与生产性能关联分析42-44
• 4.6 SNPs与体细胞数关联分析44-45
• 5 讨论45-46
• 5.1 HSP70-1单核甘酸多态性45
• 5.2 SNP对HSP70蛋白表达影响45
• 5.3 SNP对生理常数、生产性能、血清生化及体细胞数影响45-46
• 6 小结46-47
• 全文结论47
• 本文创新点和有待进一步研究的问题47-48
• 参考文献48-56
• 致谢56

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