饥饿对大黄鱼体内虹彩病毒载量及相关免疫反应影响的初步研究
发布时间：2024-10-05 06:02
大黄鱼(Larimichthys crocea)虹彩病毒病是当前危害大黄鱼养殖业最为严重的几种病害之一,多流行于夏季高温季节,一般幼龄鱼多发,死亡率最高可达50%以上,该病目前尚无有效的针对性治疗方法。近年在大黄鱼生产实际中,饥饿疗法常被运用于大黄鱼感染虹彩病毒病的治疗,本实验通过模拟临床中大黄鱼虹彩病毒病饥饿疗法试验,建立大黄鱼人工感染虹彩病毒群体,分别连续饥饿和投喂一周,采用实时荧光定量PCR法在分子水平上开展了不同组织中病毒载量以及相关免疫因子表达情况的研究,同时对免疫酶、抗氧化酶等指标进行测定分析,研究结果如下:(1)根据OIE水生动物诊断手册推荐的基因序列,成功构建虹彩病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,其最低检出限为10～2 copies/ng DNA,质粒标准曲线的相关系数为99.82%,运用该方法对自然发病大黄鱼体内病毒载量进行检测,其主要免疫器官脾脏、头肾和肝脏中病毒载量分别为8.90×10～4copies/ng DNA、1.86×10～4copies/ng DNA和1.32×10～4copies/ng DNA。(2)通过腹腔注射虹彩病毒悬液感染健康大...
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 引言
第二章 虹彩病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立
2.1 实验材料
2.1.1 实验材料
2.1.2 主要试剂
2.1.3 主要仪器设备
2.1.4 实验所用溶液及其配置
2.2 实验方法
2.2.1 特异性引物设计与合成
2.2.2 组织DNA提取
2.2.3 标准质粒的制备
2.2.4 SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立
2.2.5 自然发病大黄鱼定性检测
2.2.6 运用实时荧光定量法检测自然发病大黄鱼体内虹彩病毒载量
2.2.7 数据处理
2.3 结果
2.3.1 虹彩病毒基因片段的克隆及测序鉴定
2.3.2 重组质粒酶切鉴定及浓度测定
2.3.3 荧光定量PCR反应条件的确定
2.3.4 荧光定量PCR标准曲线的建立
2.3.5 自然发病大黄鱼样品常规PCR检测结果及qPCR结果
2.4 讨论与小结
2.4.1 小结
2.4.2 讨论
第三章 大黄鱼虹彩病毒人工感染群体建立
3.1 实验材料
3.1.1 实验动物
3.1.2 病毒株
3.1.3 主要试剂及其配制
3.1.4 主要仪器
3.2 实验方法
3.2.1 病毒悬液制备
3.2.2 攻毒试验
3.2.3 虹彩病毒的PCR检测
3.2.4 组织病理学切片制备和观察
3.3 结果
3.3.1 大黄鱼人工感染虹彩病毒的临床症状与PCR检测
3.3.2 人工感染的大黄鱼组织病理学变化
3.3.3 超微组织病理观察结果
3.4 讨论与小结
3.4.1 小结
3.4.2 讨论
第四章 饥饿对人工感染大黄鱼体内虹彩病毒载量及抗病毒基因表达的影响
4.1 实验材料
4.1.1 主要试剂
4.1.2 主要仪器设备
4.2 实验方法
4.2.1 实验分组设计
4.2.2 样本采集
4.2.3 RT引物设计
4.2.4 DNA提取及浓度测定
4.2.5 总RNA提取及cDNA合成
4.2.6 荧光定量PCR检测
4.2.7 数据处理
4.3 结果
4.3.1 饥饿组与投喂组感染后死亡率统计
4.3.2 微量分光光度计检测DNA及 RNA纯度
4.3.3 IFNc、Mx和 IgM检测引物的熔解曲线分析
4.3.4 饥饿组与投喂组主要免疫器官中病毒载量的变化
4.3.5 饥饿组与投喂组主要免疫器官中抗病毒基因的表达变化
4.4 讨论与小结
4.4.1 小结
4.4.2 讨论
第五章 饥饿对人工感染大黄鱼组织中SOD、CAT、ACP、AKP酶活性的影响
5.1 实验材料
5.1.1 组织样本
5.1.2 主要试剂
5.1.3 主要仪器设备
5.2 实验方法
5.2.1 酶液的制备
5.2.2 数据处理
5.3 结果
5.3.1 饥饿对人工感染大黄鱼组织内SOD活力的影响
5.3.2 饥饿对人工感染大黄鱼组织内CAT活力的影响
5.3.3 饥饿对人工感染大黄鱼组织内ACP活力的影响
5.3.4 饥饿对人工感染大黄鱼组织内AKP活力的影响
5.4 讨论与小结
5.4.1 小结
5.4.2 讨论
总结与展望
总结
不足和有待进一步研究的问题
参考文献
致谢
在读期间发表的学术论文及研究成果
本文编号：4007622
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 引言
第二章 虹彩病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立
2.1 实验材料
2.1.1 实验材料
2.1.2 主要试剂
2.1.3 主要仪器设备
2.1.4 实验所用溶液及其配置
2.2 实验方法
2.2.1 特异性引物设计与合成
2.2.2 组织DNA提取
2.2.3 标准质粒的制备
2.2.4 SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立
2.2.5 自然发病大黄鱼定性检测
2.2.6 运用实时荧光定量法检测自然发病大黄鱼体内虹彩病毒载量
2.2.7 数据处理
2.3 结果
2.3.1 虹彩病毒基因片段的克隆及测序鉴定
2.3.2 重组质粒酶切鉴定及浓度测定
2.3.3 荧光定量PCR反应条件的确定
2.3.4 荧光定量PCR标准曲线的建立
2.3.5 自然发病大黄鱼样品常规PCR检测结果及qPCR结果
2.4 讨论与小结
2.4.1 小结
2.4.2 讨论
第三章 大黄鱼虹彩病毒人工感染群体建立
3.1 实验材料
3.1.1 实验动物
3.1.2 病毒株
3.1.3 主要试剂及其配制
3.1.4 主要仪器
3.2 实验方法
3.2.1 病毒悬液制备
3.2.2 攻毒试验
3.2.3 虹彩病毒的PCR检测
3.2.4 组织病理学切片制备和观察
3.3 结果
3.3.1 大黄鱼人工感染虹彩病毒的临床症状与PCR检测
3.3.2 人工感染的大黄鱼组织病理学变化
3.3.3 超微组织病理观察结果
3.4 讨论与小结
3.4.1 小结
3.4.2 讨论
第四章 饥饿对人工感染大黄鱼体内虹彩病毒载量及抗病毒基因表达的影响
4.1 实验材料
4.1.1 主要试剂
4.1.2 主要仪器设备
4.2 实验方法
4.2.1 实验分组设计
4.2.2 样本采集
4.2.3 RT引物设计
4.2.4 DNA提取及浓度测定
4.2.5 总RNA提取及cDNA合成
4.2.6 荧光定量PCR检测
4.2.7 数据处理
4.3 结果
4.3.1 饥饿组与投喂组感染后死亡率统计
4.3.2 微量分光光度计检测DNA及 RNA纯度
4.3.3 IFNc、Mx和 IgM检测引物的熔解曲线分析
4.3.4 饥饿组与投喂组主要免疫器官中病毒载量的变化
4.3.5 饥饿组与投喂组主要免疫器官中抗病毒基因的表达变化
4.4 讨论与小结
4.4.1 小结
4.4.2 讨论
第五章 饥饿对人工感染大黄鱼组织中SOD、CAT、ACP、AKP酶活性的影响
5.1 实验材料
5.1.1 组织样本
5.1.2 主要试剂
5.1.3 主要仪器设备
5.2 实验方法
5.2.1 酶液的制备
5.2.2 数据处理
5.3 结果
5.3.1 饥饿对人工感染大黄鱼组织内SOD活力的影响
5.3.2 饥饿对人工感染大黄鱼组织内CAT活力的影响
5.3.3 饥饿对人工感染大黄鱼组织内ACP活力的影响
5.3.4 饥饿对人工感染大黄鱼组织内AKP活力的影响
5.4 讨论与小结
5.4.1 小结
5.4.2 讨论
总结与展望
总结
不足和有待进一步研究的问题
参考文献
致谢
在读期间发表的学术论文及研究成果
本文编号：4007622
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/zaizhiyanjiusheng/4007622.html
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