葵花籽粗油体中内源性蛋白酶系的性质探究以及鉴定

发布时间：2024-03-31 22:56

　　通过电泳探究葵花籽粗油体中内源性蛋白酶系的水解性质,以及用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)鉴定内源性蛋白酶的种类。结果表明,油质蛋白在pH 4～8水解速度相对较快,22 kDa球蛋白在pH 3～5水解速度相对较快,35 kDa球蛋白在pH 4～8水解速度相对较快。葵花籽粗油体中内源性蛋白酶系在pH 4、50℃水解速度相对最快。通过抑制剂实验发现,在pH 4下,葵花籽粗油体中有金属蛋白酶类、天冬氨酸蛋白酶类、丝氨酸蛋白酶类的酶活表征,几乎无半胱氨酸蛋白酶酶活的存在。通过LC-MS/MS分析发现,葵花籽粗油体中存在金属蛋白酶类、天冬氨酸蛋白酶类和丝氨酸蛋白酶类和天冬氨酸蛋白酶类抑制剂、丝氨酸蛋白酶类抑制剂以及半胱氨酸蛋白酶类抑制剂。研究结果为利用内源性蛋白酶类进行水相加工提供了理论基础。

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【部分图文】：

图1不同pH下水解2h后粗油体还原性Tricine-SDS-PAGE(a)及油质蛋白、22kDa球蛋白和35kDa球蛋白条带灰度分析(b)

通过对图1(a)的电泳图进行灰度分析得到图1(b),发现在pH4、50℃下油质蛋白水解速度最快,水浴2h后相对于空白被水解59%。油质蛋白在pH3时水解速度较慢,2h水解不到4%,在pH5～pH8,油质蛋白水解相对较快。这说明葵花籽粗油体中的内源性蛋白酶系偏向于中酸性....

图2不同温度下水解2h后粗油体还原性Tricine-SDS-PAGE(a)及油质蛋白、22kDa球蛋白和35kDa球蛋白条带灰度分析(b)

将稀释后的粗油体调pH至4,置于30～80℃水解2h,取样进行Tricine-SDS-PAGE分析,结果见图2。由图2b可见,在pH4时,油质蛋白在50℃时水解速度最快,2h可以水解59%左右。22kDa球蛋白也在50℃水解程度最大,2h可以水解28%,35kDa球蛋....

图3添加不同抑制剂后油质蛋白灰度分析

从图3和添加不同抑制剂后对应实验的电泳图以及22kDa球蛋白与35kDa球蛋白灰度分析结果(图略)可知,Pepstatin-A的添加对于油质蛋白、22kDa和35kDa球蛋白的水解均有一定的抑制效果,AEBSF对葵花籽粗油体中的蛋白也有微弱的抑制效果,而E-64的添加对粗....

本文编号：3944617