巴马小型猪皮肤瘢痕模型的建立及转化生长因子的表达

发布时间：2017-03-16 10:08

  本文关键词：巴马小型猪皮肤瘢痕模型的建立及转化生长因子的表达，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：建立巴马小型猪切割伤和烧烫伤皮肤增生性瘢痕模型,并在创伤愈合以及瘢痕形成的过程中检测创面组织TGF-β1/TGF-β3的表达情况。评估该动物模型对人类增生性瘢痕的模拟性。方法：取健康4月龄雌性巴马小型猪6只,体重约为13±0.6kg。全身麻醉后在动物背部制备创面,左侧切除中厚皮片；右侧利用特制温控烫伤仪调至100℃,垂直紧压皮肤20s制备烧伤创面,创面面积为3×3cm2,创面间隔为2cm。创伤制备后分笼饲养,使创口自然愈合。观察创面愈合情况,参照Nageschmidt法计算创面愈合率。创伤制备后24小时、7、14、21、28及56天随机选取动物,取创面组织标本,HE染色观察创伤愈合过程中组织学改变并测量组织厚度；Masson染色观察创伤愈合过程中胶原纤维的形态及排列并测量胶原面密度。免疫组织化学的方法检测创面愈合及瘢痕形成过程中创面组织的TGF-β1/TGF-β3蛋白表达情况。荧光定量RT-PCR检测创面愈合及瘢痕形成过程中创面组织的TGF-β1/TGF-β3 mRNA表达情况。透射电镜观察对比动物正常皮肤及创面制备后56天瘢痕组织中成纤维细胞和胶原纤维的差异。结果：1.创面制备后,切割伤表面渗血,烧烫伤创面可见散在水泡。创面制备后第28天创面颜色红,质地韧,切割伤创面愈合率达99.8%,烧烫伤创面愈合率达99.0%。创面制备后56天,创面中央可触及增生性组织,质地韧,无明显毛发生长。2、HE染色显示,创面制备后7天,创面组织中的真皮乳突层可见炎细胞及成纤维细胞趋化且增多。创面制备后56天的瘢痕组织与正常皮肤相比,成纤维细胞与胶原纤维增多,·真皮乳头消失。正常皮肤厚度约为1.298±0.305 mm,切割伤瘢痕组织厚度为3.039±0.169 mm,烧烫伤瘢痕组织厚度为4.023±0.176 mm。Masson染色可见在创伤愈合过程中创面组织的真皮乳突层可见大量较为纤细的胶原纤维,包绕成纤维细胞,网状层中的胶原纤维粗大、排列紧密且紊乱。3.透射电镜显示,在瘢痕组织中成纤维细胞呈梭形,胞体增大,胞浆丰富,核仁较大,粗面内质网增多并扩张；胶原纤维密度增加,排列紧密。3、免疫组织化学法：创面制备后7、14、21、28及56天创面组织与正常皮肤相比,TGF-β1及TGF-β3的表达差异均有统计学意义(P0.05);创面制备后7天TGF-β1阳性表达最高(P0.05),创伤制备后21天TGF-β3阳性表达最高(P0.05)。4、荧光定量RT-PCR:创面制备后7、14、21、28及56天组织与正常皮肤相比,TGF-β1及TGF-β3 mRNA的表达差异均有统计学意义(P0.05)。创面制备后7天TGF-β1mRNA相对表达量最高(P0.05),创面制备后56天组织中TGF-β1的水平仍高于正常皮肤(P0.05)；创面制备后21天TGF-β3mRNA表达水平最高(P0.05),创面制备后56天瘢痕组织TGF-β3 mRNA其表达水平仍高于正常皮肤(P0.05)。结论：1.巴马小型猪背部中厚皮片切割伤可使巴马小型猪背部产生增生性瘢痕；特制温控烫伤仪100℃,20s可致皮肤深Ⅱ度烧伤,使巴马小型猪背部产生增生性瘢痕。其瘢痕的组织学特点与人类增生性瘢痕相似。2、TGF-β1/TGF-β3在瘢痕组织中的表达特点与人类增生性瘢痕相似,提示该瘢痕模型与人的增生性瘢痕具有相似性。
【关键词】：皮肤 瘢痕 小型猪 动物模型 转化生长因子β
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R622;R-332
【目录】：

• 个人简历3-5
• 英文缩略词表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-14
• 材料与方法14-23
• 结果23-48
• 讨论48-52
• 全文总结52-53
• 参考文献53-57
• 综述57-67
• 参考文献64-67
• 致谢67

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本文编号：251630