糖原磷酸化酶同工酶BB在小型猪心肌缺血模型变化趋势分析

发布时间：2017-03-18 11:05

  本文关键词：糖原磷酸化酶同工酶BB在小型猪心肌缺血模型变化趋势分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景心血管并发症,特别是围手术期心肌梗死是非心脏手术后死亡的主要原因。随着外科手术量不断增加,围手术期心肌损伤在临床实践中越来越常见。因为超过80%的围手术期心肌损伤患者并没有明显的临床症状,大部分围手术期心肌损伤并没有明确诊断处理,此外它不明显的表现导致医生和大众对其认识有限。尽管围手术期心肌损伤在很大程度上是没有症状的,它使得手术后30天患者死亡率增加近10倍。手术中患者处于镇静睡眠状态,在很大程度上掩盖了缺血性心肌损害的临床症状,而手术所致躯体不适也会影响我们对心血管症状的甄别。因此加强围术期心血管系统监护,检测心肌缺血的早期敏感指标,可以提高心血管事件检出率以及评估冠状动脉再灌注水平。目的生物标志物作为常规临床检验的一部分可以很容易地检测。糖原磷酸化酶同工酶脑型(glycogen phosphorylaseBB,GPBB)为糖原分解的关键酶,在心肌细胞肌浆网构成糖原分解复合物,该复合物对缺血引起的糖原分解特别敏感,使其构成发生改变,形成可溶性GPBB,透过细胞膜进入血液,适于临床急诊测定。本研究通过分析GPBB在小型猪急性心肌缺血模型中动态变化趋势,特别是3小时之内的连续血清浓度变化,评估GPBB在心肌损伤中的诊断价值。方法健康雄性巴马系香猪(体重25±5kg)外科手术结扎冠状动脉,制作小型猪心肌损伤坏死模型。本实验设计了缺血再灌注组和缺血无灌注组。GPBB主要存在于与脑和心肌组织,肌肉组织为糖原磷酸化酶同工酶肌型(glycogen phosphorylase,GPMM),因此开胸手术冠状动脉结扎之后不同时间点测到的GPBB是由心肌细胞释放,而排除手术引起的肌肉损伤所致,所以本实验没有设置假手术组,而是在冠状动脉结扎前设置一次采血,记作0h,便于结扎后各时间点与其对照。选取巴马系香猪30头,随机分为两组,缺血1小时再灌注6小时(I 1h-R 6h)组20头,缺血7小时(I 7h)组10头。在全身麻醉下,监测血压、五导联心电图、脉搏氧饱和度,打开胸腔,充分暴露心脏,结扎左前降支中下三分之一处。术中I 1h-R 6h组结扎1小时松开结扎线,开放血流,I 7h组持续结扎,同时观察心电图变化。小型猪生命体征平稳时,逐层关闭胸腔,麻醉复苏。开胸后,结扎前采血一次,记作0h,结扎时刻之后0.5h、1h、2h、3h、5h和7h共计7个时间点进行静脉采血,每次3-5ml,离心取上清并立即放入-80℃冰箱冻存,血清送往医院检验科由固定检验医师检测cTnI浓度,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定GPBB浓度。7h后,麻醉处死动物,立即取出心脏。用冰冷的磷酸盐缓冲液(PhosphateBufferedSaline,PBS)冲洗干净,放入-40℃冰箱中冰冻1 h,待心肌变硬后取出,垂直于心脏长轴,自心尖向心底切成2mm厚的切片,浸没于1%的2,3,5-氯化三苯基四氮唑(triphenyltetrazolium chloride,TTC)磷酸盐缓冲液中,放入37℃恒温水浴箱30 min后取出,数码相机拍照。结果1.成功建立小型猪心肌缺血模型。I 1h-R 6h组20头,2头死于术中室颤,1头死于气道梗阻导致的窒息缺氧。I 7h组10头,1头术中室颤,1头术后死亡。2.心电图改变,结扎后ST段下降,继而上升,呈现典型心肌缺血表现。3.TTC染色后,正常心肌呈玫瑰红色,梗死心肌呈苍白色。验证心梗模型建立成功。4.两组小型猪血清cTnI浓度在不同时相变化趋势不同(P0.001)。两组之间比较有统计学差异(P0.001)。和0h相比,I 1h-R 6h组2h肌钙蛋白明显升高(P0.05),I 7h组3h后缓慢升高,5h有统计学差异(P0.05)。5.两组小型猪血清GPBB浓度在不同时相变化趋势不同(P0.001)。两组之间比较没有差异(P0.05)。和0h相比,I 1h-R 6h组1h明显升高,有统计学差异(P0.05),2h有所下降,3h再次升高,之后下降至正常水平。其峰值浓度的时间周期狭窄。I 7h组变化趋势和I 1h-R 6h组类似。结论1.在小型猪心肌缺血模型中,血清中GPBB浓度在缺血1小时后即明显升高,早于cTnI。2.持续动态监测肌钙蛋白和GPBB,可以应用于心肌缺血的早期诊断。
【关键词】：围术期心梗 生物标记物 GPBB 早期诊断
【学位授予单位】：河南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R54;R-332
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 英文缩略表8-11
• 引言11-15
• 1 材料与方法15-21
• 1.1 实验动物15
• 1.2 主要药品及试剂15-16
• 1.3 主要仪器设备16
• 1.4 实验方法16-21
• 1.4.1 实验分组16-17
• 1.4.2 建立小型猪心梗模型17
• 1.4.3 取材17-18
• 1.4.4 小型猪心肌组织TTC染色18
• 1.4.5 医院设备检测两组小型猪各时间点血清肌钙蛋白浓度18
• 1.4.6 ELISA检测两组小型猪各时间点血清GPBB浓度18-19
• 1.4.7 统计学分析19-21
• 2 结果21-27
• 2.1 成功构建小型猪心肌梗死模型21
• 2.2 心电图变化21-22
• 2.3 TTC染色22-23
• 2.4 肌钙蛋白分析23-24
• 2.5 GPBB分析24-27
• 3 讨论27-33
• 结论33-35
• 参考文献35-39
• 综述39-50
• 参考文献46-50
• 致谢50-51

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 刘怡;房殿吉;王松灵;;小型猪在口腔医学研究中的应用[J];中华口腔医学杂志;2007年07期

2 陈华;;小型猪在医学研究领域的应用进展[J];中国实验动物学报;2008年05期

3 王桂花;尹晓敏;孙霞;赵德明;;国内外小型猪资源概况[J];中国比较医学杂志;2009年02期

4 ;首届国际小型猪学术论坛在广州举行[J];中国实验动物学报;2010年01期

5 ;2010广州-东莞首届国际小型猪学术论坛顺利举行[J];中国比较医学杂志;2010年02期

6 岳敏;范沛;吴丽红;顾为望;;广州地区三种小型猪血液生理生化指标的比较[J];中国比较医学杂志;2011年08期

7 Berton F Hill;封培勤;;小型猪[J];上海实验动物科学;1988年03期

8 王爱德;覃树华;郭亚芬;蓝干球;;广西小型猪的选育(初报)[J];上海实验动物科学;1989年04期

9 秦树存;孙仁俊;;小型猪实验性动脉粥样硬化研究的回顾与展望[J];上海实验动物科学;1990年01期

10 魏泓;我国小型猪研究的现状[J];中国实验动物学杂志;1997年04期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 范沛;岳敏;吴丽红;顾为望;;广州地区三种小型猪血液生理生化指标的比较[A];第九届中国实验动物科学年会（2010新疆）论文集[C];2010年

2 马玉媛;吕茂民;吴建敏;丁芳;徐述;阳玉彪;郭艳茹;田克恭;章金刚;;我国小型猪内源性反转录病毒的相关研究[A];中国实验动物学会第七届学术年会论文集[C];2006年

3 韩雅玲;赵慧强;王守力;王斌;荆全民;;中国小型猪慢性完全闭塞病变模型的建立[A];中华医学会心血管病学分会第十次全国心血管病学术会议汇编[C];2008年

4 李洪涛;刘蓉;吴清洪;张新凤;赵瑾;钱元新;廖东江;顾为望;;野百合碱诱导小型猪慢性肺动脉高压动物模型的建立[A];第十届中国实验动物科学年会论文集[C];2012年

5 张冬梅;朱春花;邱波;闫俊;;小型猪取血方法[A];2013年（第三届）中国药物毒理学年会暨药物非临床安全性评价研究论坛论文摘要[C];2013年

6 原野;马华智;吴纯启;;小型猪作为生殖毒性实验模型的特点与优势分析[A];2013年（第三届）中国药物毒理学年会暨药物非临床安全性评价研究论坛论文摘要[C];2013年

7 张冬梅;朱春花;邱波;闫俊;;小型猪取血方法[A];中国药理学与毒理学杂志(2013年6月第27卷第3期)[C];2013年

8 原野;马华智;吴纯启;;小型猪作为生殖毒性实验模型的特点与优势分析[A];中国药理学与毒理学杂志(2013年6月第27卷第3期)[C];2013年

9 詹纯列;徐本法;李建军;李权超;;SPF小型猪阶段生长指标的测定[A];中国实验动物学会第五届学术年会论文汇编[C];2000年

10 谢忠忱;黄广勇;陈华;黄丽洁;苟鹏;贾琳;刘亚千;郭雄明;辛宁波;;小型猪高脂血症对内皮功能的影响[A];中国实验动物学会第七届学术年会论文集[C];2006年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 刘海峰;我国成功克隆出世界著名医用小型猪[N];新华每日电讯;2007年

2 北京琉璃科兴试验动物养殖中心 孙国涛;小型猪的饲养和市场前景[N];中国特产报;2008年

3 记者 王丹 通讯员 朱丹萍;我学者建立免疫缺陷小型猪模型[N];健康报;2014年

4 驻站记者 李云飞 通讯员 吕小飞;小型猪禽饲养带来大效益[N];赤峰日报;2007年

5 记者 白毅;基因敲除免疫缺陷小型猪模型建立[N];中国医药报;2014年

6 本报记者 张奇锋 通讯员 张淼;猪器官或将替代人体损坏器官[N];广东科技报;2011年

7 记者 李立平;首批体细胞克隆医用小型猪培育成功[N];大众科技报;2007年

8 记者 李志峰　实习生 姜阳;小香猪每月生活费上千元[N];重庆日报;2010年

9 瞿剑;我国科学家首次育成小型猪近交系[N];中国畜牧兽医报;2013年

10 记者 胡其峰;“小型猪近交系”首次成功育成[N];光明日报;2013年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 张华;腹腔镜技术建立小型猪肝损伤模型及肝脏环境变化的研究[D];东北农业大学;2015年

2 李伟;高渗盐溶液干预对心肺复苏后小型猪的保护作用及机制的实验研究[D];北京协和医学院;2016年

3 陶博;小型猪心肌梗死后血管新生的在体多模态融合成像及干预研究[D];第四军医大学;2016年

4 吴健敏;中国特有小型猪内源性反转录病毒的检测与全基因克隆[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年

5 崔立;实验用小型猪种群净化技术及其不同模型的建立和应用[D];南京农业大学;2005年

6 卢德章;小型猪特异性麻醉颉颃剂的研制及其催醒机理的研究[D];东北农业大学;2011年

7 陈云;小型猪实验动物化和糖尿病模型及中药“脾胃康”作用研究[D];广州中医药大学;2005年

8 彭享胜;心肌梗死小型猪围术期模型的构建及内源性血红素氧合酶-1心脏保护作用的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2005年

9 杨家大;应用实时荧光定量方法研究实验用小型猪细胞色素P450的表达[D];四川农业大学;2007年

10 崔敬;小型猪肾损伤疾病模型的构建及干预研究[D];中国人民解放军医学院;2014年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 王月;腹腔镜技术安装小型猪多血管插管的实验研究[D];东北农业大学;2015年

2 刘涛;肝脏缺血与损伤对小型猪生理功能和组织再生的影响[D];东北农业大学;2015年

3 王金侠;冠状动脉粥样硬化小型猪脑Aβ的变化及健脾祛痰化瘀法的干预作用[D];辽宁中医药大学;2015年

4 王志博;小型猪腹腔镜与开放性肾部分切除术的对比研究[D];东北农业大学;2016年

5 郑英宇;健脾祛痰化瘀法干预冠状动脉粥样硬化小型猪脑Aβ的实验研究[D];辽宁中医药大学;2016年

6 郭荣鑫;糖原磷酸化酶同工酶BB在小型猪心肌缺血模型变化趋势分析[D];河南大学;2016年

7 高铭杰;多模态小型猪心脏图像的分割与配准[D];西安电子科技大学;2015年

8 张娈松;小型猪特异性麻醉颉颃剂对小型猪血流动力学的影响[D];东北农业大学;2011年

9 马昆;小型猪特异性麻醉颉颃剂催醒效果综合监测[D];东北农业大学;2011年

10 董晓英;基于教学用途的小型猪脉涩变模型研究[D];北京中医药大学;2008年

  本文关键词：糖原磷酸化酶同工酶BB在小型猪心肌缺血模型变化趋势分析，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：254340