牛初乳抗轮状病毒的实验研究

发布时间：2017-03-18 13:08

  本文关键词：牛初乳抗轮状病毒的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景及目的轮状病毒(Rotavirus,RV)是球形立体、光滑、无包膜的双链RNA(dsRNA)病毒,属于呼肠孤病毒科、轮状病毒属,根据VP6分为A-G组,其中A组主要引起婴幼儿严重腹泻,B、C组主要导致成人腹泻,D-G组主要感染各种动物。A组轮状病毒是引起感染性腹泻的重要病原体之一,占儿童肠道感染病因的50%以上。临床上主要采取口服补液及抗病毒治疗,目前尚无有效的抗轮状病毒药物。牛初乳具有促进生长发育、增强抵抗力、调节肠道菌群等作用。本研究主要探讨牛初乳体内抗轮状病毒的作用。方法牛初乳抗A组轮状病毒的实验研究:5日龄ICR乳鼠随机分为6组,每组12只。感染轮状病毒24h后,治疗组分别给予相应浓度的牛初乳和利巴韦林连续进行治疗7天。记录每天乳鼠体重变化及腹泻情况,同时收集乳鼠粪便并检测粪便中病毒滴度及使用试纸条金标法检测粪便中轮状病毒抗原。于感染后3天、7天取乳鼠血清及小肠组织。流式细胞仪检测乳鼠血清中IL-6、IL-10、IL-12p70、TNF、IFN-γ和MCP-1的表达水平;分别取1DPI、3DPI、7DPI乳鼠小肠组织,检测其中的病毒载量;HE染色观察小肠组织形态学改变及测定空肠绒毛长度的改变;免疫组化观察乳鼠小肠中轮状病毒抗原的分布。结果和结论牛初乳高剂量组和联合治疗组与模型组相比可以增加腹泻乳鼠的体重、减轻腹泻情况;联合治疗组明显降低粪便中RV毒力;在急性感染期牛初乳高剂量组降低乳鼠血清中IL-6、IL-10和IFN-γ的表达,减轻炎症反应,在恢复期牛初乳高剂量组和联合治疗组IL-10、IFN-γ恢复至正常对照组水平(P0.05);实时荧光定量PCR结果表明,在感染初期病毒载量无明显变化,在急性感染期及恢复期,治疗组可以抑制小肠组织中病毒复制,其中在急性感染期抑制效果较明显;HE及免疫组化结果表明牛初乳可以抑制小肠组织中轮状病毒抗原的表达,改善小肠绒毛的空泡样、充血、水肿及炎性细胞的浸润等病理损伤。
【关键词】：轮状病毒 牛初乳 腹泻 炎症反应
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R373
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-7
• 英文缩写词表7-11
• 第1章 绪论11-19
• 1.1 轮状病毒概况11-18
• 1.1.1 轮状病毒的生物学性状11-13
• 1.1.2 轮状病毒的复制周期13-14
• 1.1.3 轮状病毒的致病性14-15
• 1.1.4 轮状病毒的致病机制15-16
• 1.1.5 轮状病毒腹泻的治疗16-18
• 1.2 牛初乳的认识18-19
• 第2章 牛初乳抗轮状病毒的实验研究19-39
• 2.1 实验材料19-21
• 2.1.1 药品19
• 2.1.2 细胞株19
• 2.1.3 病毒株19
• 2.1.4 实验动物19-20
• 2.1.5 主要仪器设备20
• 2.1.6 主要试剂20-21
• 2.1.7 主要试剂21
• 2.1.8 Real—time PCR引物设计21
• 2.2 实验方法21-28
• 2.2.1 细胞培养21-22
• 2.2.2 轮状病毒的扩增22
• 2.2.3 轮状病毒毒力的测定22
• 2.2.4 实验分组22-23
• 2.2.5 乳鼠腹泻模型的建立及治疗23
• 2.2.6 观察指标23
• 2.2.7 乳鼠粪便抗原的检测23-24
• 2.2.8 乳鼠粪便病毒滴度的检测24
• 2.2.9 乳鼠血清中IL-6、IL-10、IL-12p70、TNF、IFN-γ、MCP-1因子的检测24-25
• 2.2.10 Real-Time PCR检测乳鼠小肠病毒量25-27
• 2.2.11 形态学观察27-28
• 2.3 结果28-39
• 2.3.1 病毒致细胞病变情况28
• 2.3.2 轮状病毒滴度的测定28
• 2.3.3 观察指标28-32
• 2.3.4 乳鼠粪便抗原检测32
• 2.3.5 乳鼠粪便病毒毒力的检测32
• 2.3.6 乳鼠血清中IL-12p70、MCP-1、TNF、IL-6、IL-10和IFN-γ的检测32-35
• 2.3.7 Real-Time PCR检测乳鼠小肠中病毒RNA载量35-36
• 2.3.8 病理组织的改变及小肠绒毛高度的测量36-38
• 2.3.9 免疫组织化学检测38-39
• 第3章 讨论39-43
• 第4章 结论43-44
• 参考文献44-53
• 作者简介53-54
• 致谢54

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 徐金兰;;抗病毒中药的研究及临床疗效优势[J];临床合理用药杂志;2010年06期

2 夏群;陈兰举;周瑞;陈名武;丁周志;;轮状病毒致乳鼠肠道外感染Th1/Th2细胞因子变化的研究[J];中国微生态学杂志;2009年10期

3 陈军华;解元元;凌华;刘作义;;轮状病毒感染乳鼠致病机制的实验研究[J];第三军医大学学报;2007年12期

4 李忠秋;郭镇华;吴赛辉;马红;刘娣;;牛初乳中生长因子及抗菌因子的生物活性及其功能研究进展[J];中国奶牛;2006年08期

5 邵文爱;张丽媛;李康生;;抗病毒药物筛选中两种方法的比较[J];汕头大学医学院学报;2006年01期

6 杨波,伍参荣,唐小梅,胡建中,赵武能;七味白术散对人轮状病毒感染乳鼠血清IFN-γ、TNF-α的影响[J];中国中医药信息杂志;2005年03期

7 王培养;干扰素治疗重型婴幼儿轮状病毒肠炎疗效观察[J];现代中西医结合杂志;2003年08期

8 刘大功;治疗腹泻良药胃肠安丸[J];开卷有益(求医问药);2002年07期

9 董丽娟,申芳娥;婴幼儿轮状病毒肠炎的肠外病变[J];北京医学;2002年03期

10 纪绍忠,毕烨,杨红彦,杨凤蓉,宋俊其,陶小霞,崔晓英;引起成人腹泻的新轮状病毒在原代人胚肾细胞上的培养和传代[J];中华医学杂志;2002年01期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 叶绮娜;七味白术散治疗小儿轮状病毒肠炎的肠道宏基因学相关研究[D];广州中医药大学;2014年

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本文编号：254503