不同基因型的丙肝病毒NS5A蛋白与PI4KB竞争结合ACBD3的研究

发布时间：2017-03-20 04:01

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【摘要】：磷脂酰肌醇-4-磷酸(phosphatidylinositol 4-phosphate, PI4P)有利于丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus, HCV)的复制。在HCV侵染细胞中,复制区域的PI4P浓度较高。已知PI4KB (PI 4-kinases B)是促进PI4P产生的一种重要的激酶,还是促进包括脊髓灰质炎病毒和爱知病毒(Aichi virus, Aiv)在内的一些小核糖核酸病毒复制的重要蛋白。但PI4KB在HCV复制中的作用还存在一些争议。一些研究发现PI4KB是HCV复制所必须的,但是另一些研究的结果则是相反的。这种不一致的结果可能由于他们的研究对象是不同基因型的HCV导致的。一些研究中发现敲降PI4KB后,不同基因型HCV复制展现出不同的被抑制程度。但是导致这种抑制程度不同的机制尚不清楚。为了检验含乙酰辅酶A结合域蛋白3(Acyl-CoA-binding domain-containing protein 3, ACBD3)在HCV复制中的作用,我们在HCV复制系统OR6中敲降ACBD3,发现病毒蛋白的表达水平明显上升,这表明了ACBD3是HCV负调控因子。通过内源免疫共沉淀实验,我们确定NS5A与ACBD3相互作用。接下来GST-Pull Down实验证明了NS5A与ACBD3(116-327aa)结合,并且发现1b型NS5A结合ACBD3能力更强。文献已知PI4KB也与ACBD3的116-327aa结合,我们的实验也验证了NS5A和PI4KB可以竞争性结合ACBD3。进一步研究发现,ACBD3与1b型的NS5A结合能力明显高于其与2a型NS5A的结合能力,表明NS5A能挟持PI4KB/ACBD3复合物的ACBD3形成NS5A/ACBD3复合物,释放出PI4KB,并且1b型HCV侵染的细胞中ACBD3结合较少的PI4KB,更多的自由PI4KB能够产生PI4P。该研究解释了在不同基因型HCV侵染过程中病毒对PI4KB依赖性的差异机制,鉴定了新的抑制HCV侵染的蛋白ACBD3。
【关键词】：丙型肝炎病毒 包含乙酰辅酶A结合域蛋白3 磷脂酰肌醇-4-激酶B 磷脂酰肌醇-4-磷酸
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R373.21
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-7
• 第一章 前言7-17
• 第一节 丙肝流行情况及其感染、诊断和治疗情况介绍7-10
• 第二节 HCV的研究进展10-13
• 第三节 PI4P、PI4KA和PI4KB的研究进展13-14
• 第四节 ACBD3的研究进展14-15
• 第五节 本论文简介15-17
• 第二章 材料与方法17-42
• 第一节 实验材料与仪器17-25
• 第二节 实验方法25-42
• 第三章 实验结果42-59
• 第一节 ACBD3对HCV增殖的影响的研究42-44
• 第二节 ACBD3与NS5A相互作用44-45
• 第三节 PI4KB与NS5A竞争性结合ACBD3同一区段45-48
• 第四节 ACBD3对1b型NS5A与2a型NS5A亲和性不同48-52
• 第五节 进一步分析与ACBD3-116-327aa结合的NS5A具体区域52-59
• 第四章 讨论59-62
• 参考文献62-68
• 综述68-81
• 摘要68
• 1 脂滴68
• 2 脂滴是丙肝病毒组装的细胞器68-72
• 3 脂滴生成相关蛋白在丙肝病毒中的作用72-74
• 4 展望74
• 参考文献74-80
• Abstract80-81
• 附录1 本论文所用JFH1和Con1序列81-83
• 附录2 缩略语83-85
• 个人简历85-86
• 致谢86-87

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 魏来;;宿主基因和直接抗病毒药物:丙型肝炎个体化治疗的新时代[J];传染病信息;2012年02期

2 丁华;何维娜;陈望;何s

本文编号：257085