左氧氟沙星在大鼠胃黏膜体外模型中的转运特征及可能参与的载体蛋白相关研究

发布时间：2017-04-01 07:16

  本文关键词：左氧氟沙星在大鼠胃黏膜体外模型中的转运特征及可能参与的载体蛋白相关研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的采用大鼠胃黏膜与Ussing chamber技术建立胃黏膜体外模型研究左氧氟沙星在体外模型中的跨膜转运特征,并评价药物浓度、时间、方向、p H值、P-糖蛋白抑制剂(维拉帕米、环孢素A)及有机阳离子转运体抑制剂(西咪替丁)对左氧氟沙星跨胃黏膜转运的影响。方法1建立左氧氟沙星跨胃黏膜转运体外模型Wistar大鼠术前禁食24小时,麻醉后开腹,将新鲜胃迅速从腹腔中取出,并使用生理盐水对浆膜面充分清洗,自胃小弯沿轴向剖开,黏膜面在4℃Krebs-ringer液中轻柔漂洗后,使用水泡法将腺体部分未损坏的胃黏膜层与黏膜下层分离,然后将黏膜层小心地安装在尤斯扩散池中间的插口内固定,膜两侧扩散池中加入37℃、p H=7.4的Krebs-Ringer液6m L,并通入CO 2/O 2(5%/95%)混合气体。待此条件下平衡30min后,将溶液换成新鲜Krebs-Ringer液,进行相关实验。2左氧氟沙星跨胃黏膜转运研究(1)评价浓度及方向对左氧氟沙星跨胃黏膜转运的影响实验吸收方向(黏膜侧到浆膜侧的转运,M-S)实验:于M侧和S侧分别加入Krebs-Ringer液6ml。M侧加入左氧氟沙星标准品,使其终浓度分别达10、25、50、100、150μg/m L,并分别于20,40,60,80,100,120,140,160min时于S侧取200μl样品,每次取样后补充200μL Krebs-Ringer液。使用高效液相色谱法检测各个样本中左氧氟沙星浓度。分泌方向(浆膜侧到黏膜侧的转运,S-M)实验:S侧加入左氧氟沙星标准品,余同吸收方向实验。(2)评价不同的载体蛋白抑制剂对胃黏膜转运的影响实验M-S:M侧加入含左氧氟沙星50μg·m L-1与载体蛋白抑制剂的Krebs-Ringer液6 m L,S侧加入空白Krebs-Ringer液6m L。于20,40,60,80,100,120,140,160min时从S侧各取样品200μL,每次取样后补充200μL Krebs-Ringer液,使用高效液相色谱法检测各个样本中左氧氟沙星浓度。S-M:M侧加入含载体蛋白抑制剂的Krebs-Ringer液6 m L,S侧加入含左氧氟沙星50μg·m L-1的Krebs-Ringer液6m L,余同M-S。(3)评价p H对胃黏膜转运的影响实验将Krebs-ringer液p H值分别调至4.0、7.4、8.0,重复上述M-S转运实验。3建立左氧氟沙星检测的HPLC方法各个时间段样本经微孔滤膜过滤后,使用HPLC进行左氧氟沙星浓度检测,HPLC条件:流动相为乙腈-50mmol·L-1柠檬酸溶液-1mol·L-1醋酸铵溶液(17:82:1;v/v/v),Welch C18分析柱,流速1.0m L·min-1,紫外检测波长295nm,柱温40℃,进样量20μL。评价专属性、线性、回收率、精密度、稳定性。结果1对研究左氧氟沙星跨大鼠胃黏膜体外模型转运方式中所涉及的胃黏膜剥离方法、Ussing chamber技术以及本实验所用的HPLC对左氧氟沙星的检测方法稳定、可靠。2左氧氟沙星跨大鼠胃黏膜双向累积透过量均随时间的增加而增加,各个浓度的左氧氟沙星分泌方向累计透过量均大于其吸收方向的累计透过量。各个浓度的左氧氟沙星累积透过量之间以及各个浓度的左氧氟沙星表观渗透系数之间比较无显著性差异(P0.05);各个浓度的左氧氟沙星分泌方向累计透过量均大于其吸收方向的累计透过量。不同浓度的左氧氟沙星分泌方向Papp明显大于吸收方向Papp,且差异具有统计学意义(P0.05)。3左氧氟沙星(50μg?m L-1)在p H为4.0、7.4、8.0时的P app值分别为(0.95±0.07),(1.60±0.11),(1.37±0.24),Papp值在p H为7.4时最大,p H=4时的Papp值明显小于p H=7.4时(P0.01),p H=8.0时Papp值小于p H=7.4(P0.05)。4加入环孢素A后左氧氟沙星(50ug/m L)Papp(S-M)/Papp(M-S)由2.20变为1.06(P0.05);加入维拉帕米后左氧氟沙星(50ug/m L)Papp(S-M)/Papp(M-S)由2.20变为1.08(P0.01);加入西咪替丁后左氧氟沙星(50ug/m L)Papp(S-M)/Papp(M-S)由2.20变为1.78(P0.05)。结论1剥离大鼠胃黏膜是本实验的技术难点,本实验中所采用的水泡法能够达到药物跨膜转运研究的技术要求。2不同浓度的左氧氟沙星跨大鼠胃黏膜转运的累积透过量及Papp均具有显著的方向性差异,且有一定的p H依赖性,并且P-糖蛋白抑制剂环孢素A及维拉帕米可增加左氧氟沙星的吸收,减少左氧氟沙星的分泌。表明左氧氟沙星在大鼠胃黏膜体外模型中可能以载体蛋白介导的方式进行转运,P-糖蛋白可能参与左氧氟沙星跨胃黏膜转运过程。3有机阳离子转运体抑制剂西咪替丁对左氧氟沙星跨胃黏膜转运无显著影响,间接说明有机阳离子转运体可能在正常大鼠胃黏膜组织中无表达或者不参与左氧氟沙星跨正常大鼠胃黏膜转运过程。
【关键词】：左氧氟沙星 胃黏膜 尤斯扩散池 高效液相色谱法 转运
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R573;R-332
【目录】：

• 英文缩略词表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 1 前言13-16
• 2 材料与方法16-22
• 3 结果22-30
• 4 讨论30-35
• 5 结论35-36
• 6 存在的问题36
• 7 下一步设想36
• 8 参考文献36-43
• 简历43-44
• 致谢44-45
• 文献综述45-54
• 1 喹诺酮类抗菌药转运方式——载体介导的主动转运45-46
• 2 参与转运的载体46-49
• 3 结论49-50
• 4 参考文献50-54

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 胡兴萍;胡咏梅;张磊;张珊珊;许建明;;左氧氟沙星在人胃黏膜上皮细胞中的摄取特征[J];中国临床药理学杂志;2014年08期

2 王华丙;张振义;包锐;陈宇星;;ABC转运蛋白的结构与转运机制[J];生命的化学;2007年03期

3 涂春华;杨冬梓;;P-糖蛋白结构及作用机制[J];中国生物化学与分子生物学报;2009年01期

  本文关键词：左氧氟沙星在大鼠胃黏膜体外模型中的转运特征及可能参与的载体蛋白相关研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：280225