鼠抗人B7-H4受体单克隆抗体的研制及其生物学功能的初步研究

发布时间：2017-04-09 09:01

  本文关键词：鼠抗人B7-H4受体单克隆抗体的研制及其生物学功能的初步研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：B7-H4(别称B7S1或B7x),是2003年发现的B7家族新分子。人的B7-H4基因含有5个内含子和6个外显子,编码区基因长度为849个bp,位于人染色体的1p11.1。作为一种重要的负性刺激因子,当B7-H4分子与相应受体结合后,会抑制ERK和JNK蛋白激酶活性,抑制IL-2基因转录,阻断了PI3K/AKT途径,从而影响了细胞周期和细胞凋亡,抑制一些细胞因子的分泌和T细胞的增殖。越来越多的文献报道,B7-H4分子高表达于多种肿瘤中,如肺癌、肾癌、乳腺癌、胃癌、卵巢癌、前列腺癌和食管癌等。另外,在一些肿瘤浸润性巨噬细胞及肿瘤的血管内皮细胞也检测到B7-H4的高量表达,这些研究显示B7-H4作为一种新的肿瘤标志物为研究其在机体肿瘤免疫逃逸中的机制和癌症的治疗提供了帮助。本课题组在来源于人扁桃体的部分淋巴细胞中检测到B7-H4受体的表达,并以此为基础研制鼠抗人B7-H4受体的单克隆抗体,并运用本课题组建立的非小细胞肺癌细胞株SPCA-1与Jurkat细胞共培养的体系初步研究了单克隆抗体的生物学功能。鼠抗人B7-H4受体单克隆抗体的研制及其生物学功能的初步研究【目的】研制鼠抗人B7-H4受体的单克隆抗体并初步研究其生物学功能【方法】从人体扁桃体组织中获取淋巴细胞,并以此为免疫原,免疫5~8周龄的BALB/c小鼠,融合当天取小鼠脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞Ag8融合。一段时间后,运用流式细胞技术(FCM)对杂交瘤上清进行初步筛选,以B7-H4-m Fc-FITC为基础,通过位点竞争抑制试验进一步筛选,再通过多次亚克隆技术获得能稳定分泌抗B7-H4受体单克隆抗体的细胞株。通过快速试纸法测定目标单抗的Ig亚型,对纯化后的单抗标记生物素后借助Western Blot实验和ELISA实验对单克隆抗体进行鉴定。结合本课题组建立的SPCA-1细胞与Jurkat细胞共培养的体系初步研究单克隆抗体的功能。【结果】获得了一株能稳定分泌鼠抗人B7-H4受体的单克隆抗体,命名为7B11。经快速试纸法鉴定7B11为Ig G1类,Western Blot结果显示7B11不能与人B7-H4受体蛋白特异性结合,但ELISA实验结果表明7B11能特异性识别B7-H4受体蛋白。将7B11加入到SPCA-1细胞与Jurkat细胞共培养的体系作用72小时后,能阻断SPCA-1细胞表达的B7-H4分子对Jurkat细胞的作用,使Jurkat细胞上CD3、CD69的表达水平及细胞增殖水平趋近正常。【结论】成功研制了一株鼠抗人B7-H4受体的单克隆抗体,该单克隆抗体在共培养体系中能与B7-H4受体结合阻断了B7-H4分子的负性调控作用,为进一步研究B7-H4及其受体等肿瘤标志物在肿瘤免疫应答中的作用提供了帮助。
【关键词】：B7-H4 B7-H4受体 单克隆抗体 共培养
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R392
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 研究背景9-26
• 参考文献17-26
• 1 实验材料、器材与试剂26-31
• 2 实验方法31-40
• 3 实验结果40-51
• 4 讨论51-52
• 总结与展望52-53
• 参考文献53-56
• 研究生期间发表的论文56-57
• 缩略词表57-59
• 致谢59-61

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 段薇,张健,郑剑玲,苏丹,王美慧;抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体的研制[J];微生物学杂志;2004年05期

2 张唯敏;;新单克隆抗体已应用于临床[J];国外医学(肿瘤学分册);1986年04期

3 迟素敏;;单克隆抗体的制备和鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;1986年Z1期

4 张明杰;单克隆抗体在农业中有何用途?[J];细胞与分子免疫学杂志;1991年02期

5 孙国凤;;单克隆抗体药品在日本通过调查会[J];生物技术通报;1991年09期

6 ;一种制备单克隆抗体的更有效而经济的方法[J];国外医学(临床生物化学与检验学分册);1998年05期

7 任新玲,沈丽英,金伯泉,井晓梅,王睿;表皮生长因子受体单克隆抗体抗肺癌作用的研究[J];第四军医大学学报;2000年03期

8 章波,陈惠鹏,范国才,陈吉中,王清明;抗人肝再生增强因子单克隆抗体的研制[J];免疫学杂志;2000年06期

9 李凤英,陈名道,顾卫琼,陈春荣,唐金凤;人瘦素单克隆抗体的鉴定[J];放射免疫学杂志;2000年02期

10 陈志南,蒋建利;单克隆抗体——从鼠到人[J];国外医学(免疫学分册);2000年03期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 徐爽;安万新;胡荣花;叶萍;孟祥昱;;不同方法收集单克隆抗体浓缩后的比较[A];中国输血1999年年会暨纪念ABO血型发现100周年学术交流论文专辑[C];1999年

2 刘大维;高斌;;狂犬病毒单克隆抗体的研制[A];2010年中国科学院微生物研究所博士后学术年会暨第二届博谊论坛论文摘要集[C];2011年

3 陈炅;;治疗性单克隆抗体的作用靶点及临床应用[A];2013年中国临床药学学术年会暨第九届临床药师论坛论文集[C];2013年

4 徐爽;徐焱;;单克隆抗体在输血领域的应用探讨[A];中国输血1999年年会暨纪念ABO血型发现100周年学术交流论文专辑[C];1999年

5 彭虹;舒翠丽;刘永全;王华;高杰英;;抗人α4单克隆抗体的制备和鉴定[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年

6 祭芳;史建荣;陈正贤;徐剑宏;陆琼娴;;抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体的制备[A];中国植物病理学会2008年学术年会论文集[C];2008年

7 张光波;董秋明;於葛华;李文香;张学光;;一株鼠抗人4-1BB单克隆抗体的研制及其生物学功能的鉴定[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年

8 张锦超;杨金菊;吴琼;李戬;陈勇;李辉;宋颖博;罗晓彤;任飞;高媛;杜雪梅;鞠艳芳;王兆卿;王京兰;徐菡;柳晓兰;崔玉芳;钱小红;贺福初;高建恩;孙启鸿;;高效鉴定单克隆抗体所识别未知抗原技术平台的建立及应用[A];中国蛋白质组学第二届学术大会论文摘要论文集[C];2004年

9 杨永昌;王北宁;赖春宁;黎燕;;抗血小板单克隆抗体重组质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达[A];第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2006年

10 孙效;高新;尚明美;宋海峰;汤仲明;;抗胰高血糖素样肽单克隆抗体的制备[A];第八次全国药物与化学异物代谢学术会议论文摘要[C];2006年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 记者 尹晖;单克隆抗体研发进入新阶段[N];无锡日报;2010年

2 编译 李勇;单克隆抗体：生物类似药开发的秘钥[N];医药经济报;2014年

3 广凯;单克隆抗体药物将有大发展[N];中国医药报;2000年

4 ;单克隆抗体应用前景看好[N];中国医药报;2002年

5 黄东临;罗氏叱咤单克隆抗体市场[N];医药经济报;2005年

6 ;单克隆抗体异军突起[N];中国高新技术产业导报;2003年

7 尹晖;全球最大单克隆抗体研制基地落户无锡[N];中国医药报;2010年

8 尹晖;最大单克隆抗体研制项目在马山奠基[N];无锡日报;2010年

9 数文;罗氏买进抗癌单克隆抗体[N];中国医药报;2008年

10 毛文波;单克隆抗体：征服癌症的新方法[N];科技日报;2004年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 魏德强;以植物病毒为载体建立新型的载体—半抗原免疫体系[D];东北林业大学;2014年

2 王璞;以CD146为靶点的胃癌早期诊断多功能纳米探针的相关研究[D];第三军医大学;2015年

3 白宇;马γ-干扰素单克隆抗体的制备及细胞免疫评价方法的研究[D];中国农业科学院;2008年

4 余自强;抗血小板胶原受体糖蛋白VI单克隆抗体的制备和功能研究[D];苏州大学;2005年

5 秦克锋;单纯疱疹病毒糖蛋白的特性研究及其单克隆抗体的临床应用[D];第四军医大学;1989年

6 游晓华;脑钠肽单克隆抗体的制备及初步临床应用研究[D];第二军医大学;2006年

7 孟星宇;芘和萘单克隆抗体的制备及免疫检测技术的研究[D];吉林大学;2015年

8 胡敏;载脂蛋白M重组蛋白和单克隆抗体的制备及其初步临床应用[D];中南大学;2008年

9 温新宇;人CD38分子的克隆表达、单克隆抗体的制备及其功能的初步研究[D];第二军医大学;2005年

10 秦迎松;人促血液血管细胞生成素（Haemangiopoietin, HAPO）单克隆抗体的制备、鉴定及应用[D];中国协和医科大学;2004年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 王晓磊;流行性乙型脑炎病毒单克隆抗体的制备与prM-E蛋白抗原捕获ELISA检测方法的建立[D];中国农业科学院;2015年

2 葛新杰;NT-proBNP单克隆抗体的研制及ELISA定量检测方法的建立[D];郑州大学;2015年

3 张标;鼠抗人B7-H4受体单克隆抗体的研制及其生物学功能的初步研究[D];苏州大学;2015年

4 郑莹;CD123在儿童B系急性淋巴细胞性白血病中的表达与抗人CD123单克隆抗体的制备[D];苏州大学;2015年

5 董倩;JEV NS2B蛋白单克隆抗体的制备及其应用[D];华中农业大学;2015年

6 薛翼鹏;猪CR1-like单克隆抗体的制备及CR1-like在猪红细胞膜表面分布状态的研究[D];山西农业大学;2015年

7 缪欢;JEV PrM/M蛋白单克隆抗体的制备及JEV P3感染U251细胞蛋白质组学分析[D];华中农业大学;2015年

8 仲晓丽;犬副流感病毒单克隆抗体的制备及单链抗体蛋白的表达和活性鉴定[D];华中农业大学;2015年

9 刘静静;绵羊早孕因子单克隆抗体的制备及鉴定[D];河北农业大学;2015年

10 安莲;B型流感嗜血杆菌寡糖缀合物疫苗的免疫活性研究相关单克隆抗体的制备[D];山东大学;2015年

  本文关键词：鼠抗人B7-H4受体单克隆抗体的研制及其生物学功能的初步研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：294883