水泡性口炎病毒核衣壳蛋白和磷酸蛋白上关键氨基酸的功能研究

发布时间：2021-07-13 15:49

　　许多能导致人类传染病的病毒（如麻疹病毒、狂犬病毒、呼吸道合胞病毒和人副流感病毒等）都属于不分节负链RNA病毒。水泡性口炎病毒（VSV）是研究不分节负链RNA病毒的的模式病毒,该类病毒在细胞质内的复制与转录是依赖于自身所携带的聚合酶来完成的。构成VSV的聚合酶的蛋白包括核衣壳蛋白（Nucleoprotein,N）、磷酸蛋白（Phosphoprotein,P）和大聚合酶蛋白（Large protein,L）,其中核衣壳蛋白在病毒复制转录过程中起着形成复制转录模板,保护病毒基因组不被核酶降解的作用,而磷酸蛋白作为聚合酶辅助因子是一个高度磷酸化的蛋白,在病毒生活史中参与了帮助核衣壳蛋白对病毒基因组的特异性识别以及调节病毒复制转录的过程。本论文通过对核衣壳蛋白与磷酸蛋白上氨基端的氨基酸进行点突变,以找出对其功能发挥起重要作用的氨基酸位点,并且进一步揭示这些氨基酸在病毒复制转录过程中所扮演的角色。近年来的研究表明,在VSV的N-RNA复合体中,一个单体的N蛋白分子通过氨基端的臂（N-terminal arm）与相邻的N蛋白相互作用包裹基因组RNA,形成功能性的N-RNA模板。当病毒自身的聚合酶在模... 

【文章来源】：武汉大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：89 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

电镜下VSV病毒粒子形态（图片来自维基百科）

武汉大学博士学位论文于VSV而设计的治疗载体方面有很大的帮助。例如，基质蛋白会通过身的RNA依赖的RNA聚合酶（RdRp)来调控其基因的转录。这个现象病毒感染的后期，基质蛋白的积累会促进无活性的RNP核心的产生，为包毒颗粒做准备。基质蛋白含有所谓的“后期功能域”（late domain)在VSV程中发挥着重要作用，这个结构域中包含一个重要的PPPY基元，它调节白与细胞中的一个在其他包膜病毒出芽中起泛素连接酶作用的NEDD4的用(Harty, 2001; Jayakar, 2000)。基质蛋白质还包含一个PSAP基元，该基元病毒（艾滋病毒和埃博拉病毒）出芽过程中与细胞蛋白TSG101结合，帮出芽。但在VSV的出芽中的功能尚不明r(Martin-Serrano, 2001)。

Conzelmann和同事包装出了重组的狂犬病毒，这也是第一次完全从cDNA获得的负链RNA病毒（图1-10)。在实验室中，编码狂犬病毒N,P,L蛋白以及病毒的anti基因组RNA的质粒被共同转染进入细胞，并且都通过T7 RNA聚合酶来进行转录。由于真核细胞中没有T7RNA聚合酶，所以上述细胞还需要用携带T7 RNA聚合酶的重组的痘病毒进行感染。这一试验成功的一个关键因素在于从cDNA上被T7 RNA聚合酶合成出来的是正义的anti基因组RNA。因为如果从cDNA上被T7 RNA聚合酶首先合成出来的负义的基因组RNA，那么这一RNA就会与从编码N,P,L质粒上转录出来的正义的mRNA杂交形成双链结构，这样就会干扰重组病毒的形成。此外，由于一些负链RNA病毒的基因组RNA上包含连续的尿瞭唆并且后面跟着发卡结构，这一结构与T7 RNA聚合酶是别的转录终止序列类似

【参考文献】：
博士论文
[1]SsNSRV-1基因功能及其与核盘菌互作机制研究[D]. 高知枭.华中农业大学 2020

硕士论文
[1]19种化合物抗大口黑鲈弹状病毒活性筛选[D]. 张雨.西北农林科技大学 2019



本文编号：3282351