小鼠巨细胞病毒荧光定量PCR检测方法的建立及应用

发布时间：2021-07-13 18:47

　　目的建立小鼠巨细胞病毒（Mouse Cytomegalovirus,MCMV）荧光定量PCR方法并对其进行初步应用。方法选取NCBI发表的MCMV Smith株DNA polymerase基因保守序列设计引物探针,建立MCMV的荧光定量PCR方法,对方法的特异性、敏感性、重复性及稳定性进行验证,并应用该方法检测掺入MCMV的小鼠血液样品及2018年度送检的409份小鼠血液样本。结果建立的MCMV荧光定量PCR方法标准曲线Slope为-3. 418,R2值为0. 999,扩增效率为96. 137%,可定量检测到的MCMV最低含量为47 copies/μL。以大鼠巨细胞病毒,猴巨细胞病毒,人单纯疱疹病毒,伪狂犬病毒及猫疱疹病毒I型为模板均无扩增曲线,特异性良好。方法组内和组间变异系数分别为0. 39%～0. 68%和0. 48%～1. 01%,重复性和稳定性好。可检测到掺入小鼠血液样品中MCMV病毒的最大稀释度为1∶1000（100. 75 TCID50/0. 1 m L）,409份小鼠血液样品经检测均为阴性。结论建立的小鼠巨细胞病毒荧光定量PCR方法有很好的敏感性、特异性及稳定性,可有效... 

【文章来源】：实验动物科学. 2019,36(06)

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

MCMV荧光定量PCR标准曲线

MCMV荧光定量PCR方法扩增曲线

如图3所示，4.7×109～4.7×101copies/μL各稀释度的质粒标准品均出现S型扩增曲线，而4.7×100copies/μL的3个平行实验有1个未出现S型扩增曲线，说明本方法最低可定量检测到47copies/μL的样品。用MCMV FQ-PCR方法和常规PCR方法检测同样的10-1至10-8系列稀释的MCMV核酸样品，由图4可见，MCMV FQ-PCR方法最低可检测到10-4稀释度的MCMV核酸，常规PCR最低可检测到10-2稀释度，表明MCMV FQ-PCR方法敏感性比常规PCR方法高两个数量级;用建立的MCMV FQ-PCR方法与文献报道的FQ-PCR方法检测相同的10-1至10-8系列稀释的MCMV核酸样品，每个稀释度做3个平行，两种方法检测到的最大稀释度均为10-4，但本方法每个稀释度的Ct值均值均低于文献方法(表3)，说明本方法的敏感性高于文献方法。图4 MCMV荧光定量PCR方法(A)与常规PCR方法(B)敏感性比较

【参考文献】：
期刊论文
[1]同时检测小鼠微小病毒（MVM）和小鼠细小病毒（MPV）的荧光定量PCR的建立及应用[J]. 王淑菁,林欢,付瑞,李晓波,王吉,岳秉飞,贺争鸣.  实验动物科学. 2018(04)
[2]应用实时荧光定量PCR方法检测实验用猫巴尔通体的感染[J]. 冯育芳,邢进,王吉,付瑞,岳秉飞.  实验动物科学. 2018(04)
[3]小鼠巨细胞病毒PCR诊断方法的建立及其应用[J]. 杜凯,吴德国,赵德明.  实验动物科学. 2015(05)
[4]我国实验小鼠群中巨细胞病毒自然感染情况的调查[J]. 汤家铭,袁云华,程鸿.  中国病毒学. 1992(02)



本文编号：3282604