基于荧光素酶报告基因的pre-mRNA剪接的分子影像研究

发布时间：2021-08-23 10:12

　　目的:在大多数真核生物基因中,蛋白质编码序列（外显子）被非编码序列（内含子）中断,在细胞核输出翻译成蛋白质之前需要移除细胞核中的内含子。由此说明,pre-mRNA剪接是大多数真核生物基因表达的一个重要步骤,对细胞的生理功能和病理状态都有着重要的意义。在近些年的研究中,mRNA水平上的基因表达通常用传统的生物化学方法进行监测。然而,这些方法一般只能在体外进行检测或受到分子特异性的影响,不能实时准确地监测pre-mRNA剪接过程,也不能完全实现在活体中的pre-mRNA剪接成像的研究,所以开发理想的分子探针实时监测pre-mRNA剪接过程是十分必要的。材料和方法:在本研究中,我们首先在荧光素酶基因阅读框内嵌合了一个人工内含子,构建了一个荧光素酶报告基因（Luc-intron）,同时设立了一个不含内含子的对照荧光素酶报告基因（Luc-control）。我们利用慢病毒系统构建了A549-luc-intron和A549-luc-control两种稳定的细胞系,之后我们采用双色荧光素酶报告系统方法检测荧光素酶活性在外源药物异银杏双黄酮（ISO）作用下的药物剂量和时间的依赖性,并采用RT-PCR对剪... 

【文章来源】：西安电子科技大学陕西省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：84 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

不同内含子剪接过程

西安电子科技大学硕士学位论文，依赖的 ATP 稳定了分支点和 U2 snRNP 之间的相互作用，导致了 U4， snRNP 复合物的结合[12,13]，这个合成体的多个构象重排随后产生催化活，其中 U1 和 U4 snRNP 释放；最后，在 5’和 3’剪接位点的分离和套索产后外显子连接发生[14,15]，如图 1.2 所示 pre-mRNA 的剪接机制。

图 1.3 双色荧光素酶报告系统检测机理素酶基因的优点酶基因广泛应用于很多领域，如标记基因、标记细胞、标记微生基因系统、药物高通量筛选、活体生物体内成像等。技术相比，荧光素酶基因具有使其更适合成为报告蛋白的几个特需要外部光激发，并且在荧光素酶底物，ATP，镁和氧的存在下波长的光[64]。第二、在荧光素酶底物存在的情况下，荧光素酶的 小时）允许实时测量，因为荧光素酶不会在含有其他报告基因、体外荧光素酶浓度与发射光峰高之间的关系线性高达 7-8 个数性质潜在地允许在活体中荧光素酶报告基因表达的灵敏无创成像体内使用荧光素酶蛋白质的主要限制是缺乏足够的灵敏度可用们用于细胞培养和小而透明的生物体[67,68]。然而，现在已经取得平的可见光的若干技术进步。究的主要内容


本文编号：3357669