双基因NGF-IRES-BMP2真核质粒转染大鼠BMSCs诱导成骨的实验研究

发布时间：2017-05-12 15:14

  本文关键词：双基因NGF-IRES-BMP2真核质粒转染大鼠BMSCs诱导成骨的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的运用基因工程的手段将双基因真核质粒载体pCDNA3.1-NGF-IRES-BMP2转染入大鼠BMSCs中,研究其诱导成骨后目的蛋白的表达情况方法取三月龄SD大鼠,颈椎脱臼处死后,通过全骨髓培养法分离培养大鼠BMSCs并稳定传代。倒置相差显微镜下观察细胞生长形态,运用流式细胞仪检测大鼠BMSCs表面标志物CD31、CD90。取第三代大鼠BMSCs,分为五组,单基因pCDNA3.1-NGF转染组(A组),单基因pCDNA3.1-BMP2转染组(B组),双基因pCDNA3.1-NGF-IRES-BMP2转染组(C组),空质粒组(D组),阴性对照组(E组)。运用Lipofectamine2000介导将各组基因转染入大鼠BMSCs。western-blot检测目的基因蛋白表达情况,并用BioRad凝胶图像分析系统测定各组灰度值。免疫组织化学染色检测I型胶原蛋白表达含量。茜苏红染色测定各组BMSCs钙结节并计数。数据进行统计学分析。结果显微镜观察BMSCs成功分离培养并稳定传代;流式细胞仪测定BMSCs表面标志物,CD90表达阳性,CD31表达阴性;各组基因转染BMSCs后,western-blot、I型胶原免疫组化染色、茜苏红染色钙结节及统计学分析均提示双基因转染组的目的蛋白表达量、I型胶原蛋白表达量、钙结节形成数目均高于单基因转染组、空质粒组以及阴性对照组。统计学分析结果p0.05,有差异。结论转染双基因pCDNA3.1-NGF-IRES-BMP2组BMSCs可同时表达两种目的蛋白,并能诱导BMSCs向成骨细胞分化,且两者具有协同成骨作用。
【关键词】：BMSCs 转染 NGF BMP2 诱导成骨
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R3416
【目录】：

• 中文摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 英汉缩略词对照表8-9
• 前言9-10
• 1 材料与方法10-20
• 1.1 实验试剂与仪器10-11
• 1.2 主要实验试剂11-13
• 1.3 实验方法13-20
• 2 结果20-25
• 2.1 大鼠BMSCs形态学观察20-21
• 2.2 大鼠BMSCs流式细胞鉴定21-22
• 2.3 western blot检测NGF与BMP2目的蛋白的表达22-23
• 2.4 免疫组织化学染色检测I型胶原蛋白的表达23-24
• 2.5 转染后各组大鼠BMSCs培养14天后进行茜苏红染色并钙结节计数24-25
• 3 讨论25-30
• 4 结论30-31
• 5 参考文献31-35
• 综述35-51
• 参考文献45-51
• 攻读学位期间发表的学术论文目录51-52
• 致谢52-53

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1 陈宁;双基因NGF-IRES-BMP2真核质粒转染大鼠BMSCs诱导成骨的实验研究[D];桂林医学院;2015年

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本文编号：360129