登革热病毒分型及患者细胞因子mRNA水平研究

发布时间：2017-05-15 00:07

  本文关键词：登革热病毒分型及患者细胞因子mRNA水平研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的利用高分辨率熔解曲线(HRM)分析技术,对四型登革热病毒(DEV)进行快速准确分型鉴定,弥补现有分型方法的不足;利用定量PCR方法,检测登革热患者体内白细胞介素12(IL-12)、白细胞介素10(IL-10)、白细胞介素6(IL-6)、干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α) mRNA的表达水平,阐明人体在登革热病毒感染期,体内固有免疫和适应性免疫的情况。方法1.根据NCBI公布的序列,设计HRM分型引物,对不同型别登革热进行分型鉴定,并进行灵敏度和特异性试验,同时采用测序、荧光PCR和普通PCR方法,对HRM分型结果进行验证试验。2.对21例登革热患者和21例健康对照者采集静脉血,用比较CT值法(2-ΔΔCT),检测IL-12、IL-10、IL-6、IFN-γ、TNF-α mRNA的表达水平,分析登革热患者相关细胞因子mRNA变化情况及其与健康对照组之间的差异。结果1.应用HRM分析技术,可对四型登革热病毒进行准确分型,灵敏度高,特异性强,HRM分型结果与测序、荧光PCR和普通PCR分型结果无异。2.登革热患者体内IL-12、IL-10、IFN-γ、TNF-α mRNA的表达水平较健康对照组显著升高,有显著性差异(P0.01,0.05,0.01,0.05)；IL-6 mRNA的表达水平较健康对照组有所降低,但无显著性差异(P0.05)。结论1.本研究建立了登革热病毒PCR-HRM分型检测方法,与测序、荧光PCR和普通PCR相比,该方法为登革热分子诊断提供了一种更为快速、准确、廉价的检测方法。2.登革热病毒(DEV)感染可以导致患者体内IL-12、IL-10、IL-6、IFN-γ、 TNF-a五种细胞因子mRNA表达水平的变化,这些细胞因子可能在登革热的发病机制和免疫调节中发挥作用。3. Th1/Th2细胞因子失衡,在登革热患者感染过程和疾病转化中可能发挥重要作用。登革热患者IL-12 mRNA升高可以促进Th1类细胞因子分泌并抑制Th2类细胞因子分泌,发挥Th1免疫应答优势。
【关键词】：登革热病毒 HRM 分型 细胞因子 mRNA
【学位授予单位】：安徽理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R512.8;R440
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-15
• 注释说明清单15-16
• 引言16-18
• 1 HRM分析技术在登革热病毒分型中的研究和应用18-41
• 1.1 前言18-19
• 1.2 材料与方法19-23
• 1.2.1 细胞株19
• 1.2.2 病毒株19
• 1.2.3 主要仪器19-20
• 1.2.4 主要试剂20-21
• 1.2.5 主要溶液的配制21-22
• 1.2.6 引物设计与合成22-23
• 1.3 实验方法23-29
• 1.3.1 细胞培养23
• 1.3.2 病毒培养23
• 1.3.3 病毒RNA提取23-24
• 1.3.4 RNA质量检测24
• 1.3.5 cDNA合成24-25
• 1.3.6 特异性试验25
• 1.3.7 PCR扩增及HRM分析25-26
• 1.3.8 灵敏度试验26
• 1.3.9 测序验证26-27
• 1.3.10 荧光PCR验证27-28
• 1.3.11 普通PCR验证28-29
• 1.4 实验结果29-37
• 1.4.1 正常C6/36细胞29
• 1.4.2 病毒在C6/36细胞中增殖29-30
• 1.4.3 病毒RNA提取结果30
• 1.4.4 引物特异性30-31
• 1.4.5 PCR-HRM分析结果31-32
• 1.4.6 PCR-HRM灵敏度32-33
• 1.4.7 临床样本检测结果33-34
• 1.4.8 测序结果34-35
• 1.4.9 荧光PCR结果35-36
• 1.4.10 普通PCR结果36-37
• 1.5 讨论37-41
• 2 登革热患者体内细胞因子mRNA表达水平及意义41-56
• 2.1 前言41
• 2.2 材料与方法41-46
• 2.2.1 病例筛选41
• 2.2.2 健康对照41
• 2.2.3 主要仪器41-42
• 2.2.4 主要试剂42-43
• 2.2.5 主要溶液的配制43-44
• 2.2.6 引物设计与合成44
• 2.2.7 比较CT值法(2~(-ΔΔCT))公式推导44-46
• 2.3 实验方法46-49
• 2.3.1 总RNA提取46-47
• 2.3.2 RNA质量检测47
• 2.3.3 cDNA合成47-48
• 2.3.4 标准曲线制备48
• 2.3.5 RT-PCR检测mRNA表达水平48-49
• 2.3.6 统计学分析49
• 2.4 实验结果49-54
• 2.4.1 总RNA提取结果49
• 2.4.2 标准曲线制备结果49-50
• 2.4.3 RT-PCR检测结果50-52
• 2.4.4 数据分析52-54
• 2.5 讨论54-56
• 结论56-57
• 参考文献57-62
• 附录A 双脱氧终止法测序结果62-66
• 后记或致谢66-67
• 作者简介及读研期间主要科研成果67

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1 陈泽燕;118例登革热个案调查分析[J];广东卫生防疫;2001年01期

2 ;台湾地区登革热的流行情况与防治[J];海峡预防医学杂志;2001年02期

3 谢敏,王彤,谭秀莲,余涛,徐改凤;登革热147例临床特点分析[J];岭南急诊医学杂志;2003年01期

4 陈如花,徐莹,王玉;登革热83例临床分析[J];福建医药杂志;2005年05期

5 陈建军;2001～2004年美国旅行引起的登革热感染[J];疾病监测;2005年09期

6 徐建荣;登革热及其防治的研究进展[J];上海预防医学杂志;2005年04期

7 袁荣宝,王海明;登革热的研究进展[J];上海预防医学杂志;2005年05期

8 Domingues R.B.;Kuster G.W.;Onuki De Castro F.L. ;刘凯;;登革热病毒感染患者的头痛特征[J];世界核心医学期刊文摘(神经病学分册);2006年10期

9 赫兢;赵敏;;登革热防治研究进展[J];国际病毒学杂志;2006年06期

10 叶建杰;胡利明;褚邵杰;胡向前;;登革热流行病学概况[J];中国预防医学杂志;2007年04期

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1 董红军;;登革热防治研究进展[A];2005年浙江省医学病毒学、医学微生物与免疫学学术会议论文汇编[C];2005年

2 洪文昕;张复春;陈燕清;王建;;广州市三种血清型登革热患者的临床特点对比分析[A];第七次全国肾综合征出血热学术会议论文汇编[C];2006年

3 鲍晓伟;黄勇;李乙江;洪雪花;张泉鹏;王意银;杜强;王伟;李刚山;邱薇;郑颖;张富强;范泉水;李作生;;登革热病毒的实验室诊断研究进展[A];第二届全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2008年

4 丁壮;;登革热研究进展[A];人畜共患传染病防治研究新成果汇编[C];2004年

5 蒋丽亚;;卢湾区2001～2002年危害登革热传入危险程度现状监测[A];上海市预防医学会第二届学术年会论文汇编[C];2006年

6 罗会明;何剑峰;梁文佳;郑夔;刘礼平;;登革热流行病学与控制[A];第七次全国肾综合征出血热学术会议论文汇编[C];2006年

7 王彤;谢敏;谭秀莲;吴海东;施旖旎;;2002年广州市登革热流行的临床特征分析[A];中华医学会急诊医学分会第十次全国复苏中毒学术论文交流会论文汇编[C];2004年

8 刘健毅;董红军;张姝;;两种检测方法在登革热疫情中的应用研究[A];2005年浙江省医学病毒学、医学微生物与免疫学学术会议论文汇编[C];2005年

9 魏新荣;;传统医学辨治登革热[A];中国中医药学会建会20周年学术年会专辑(下)[C];1999年

10 张明江;陆永昌;张家祝;丁永健;陆永贵;;登革热流行现状及防治对策[A];全国EID研讨班资料汇编[C];2004年

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1 本报驻伊斯兰堡记者　 周戎;巴基斯坦研究抗击登革热[N];光明日报;2006年

2 记者 刘海英;抗体会助长登革热病毒感染更多细胞[N];科技日报;2010年

3 记者 王昭;瑞士成功分离出登革热病毒抗体[N];人民日报;2010年

4 记者 张奇锋 通讯员 黄爱成 刘李云;中大将利用新方法防控登革热[N];广东科技报;2011年

5 刘国信;登革热，又到流行季[N];21世纪药店;2013年

6 戴欣 本报记者 罗朝淑;预防登革热：防蚊控蚊是关键[N];科技日报;2014年

7 无锡市人民医院主任药师 陆基宗;出游谨防染上“登革热”[N];中国医药报;2014年

8 记者 柴玉;发挥中医药防控登革热优势[N];中国中医药报;2014年

9 中山大学药学院新药研究与开发中心常务副主任 秦卫华;围剿登革热并非触不可及[N];医药经济报;2014年

10 天津市卫生防病中心 主任医师 于长水;病人→←蚊媒：登革热的恶性循环[N];健康报;2001年

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1 沈纪川;媒介和气象因素对广州登革热流行的影响及其预测模型的建立[D];南方医科大学;2015年

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4 何江;登革热病毒分型及患者细胞因子mRNA水平研究[D];安徽理工大学;2016年

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7 谭俊;云南省边境地区西双版纳州关累口岸登革热流行的潜在风险因素调查[D];大理学院;2012年

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