甲型流感病毒纯化及病毒生物学特征分析

发布时间：2017-05-31 18:04

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【摘要】：目的评价蔗糖密度梯度离心纯化甲型流感病毒的方法,并对纯化的病毒颗粒特征和免疫原性进行分析。方法接种鸡胚培养病毒,收获尿囊液,超速离心浓缩,蔗糖密度梯度离心纯化病毒,用血凝试验、蛋白定量、透射电镜和SDS-PAGE鉴定病毒颗粒。取病毒纯化产物以0.03mg/只和0.005mg/只分组免疫小鼠,采集小鼠血清,利用血凝抑制试验测定血清血凝抑制滴度。结果成功利用蔗糖密度梯度离心法纯化出流感病毒,病毒原液经纯化后被分离成L、M、H三个病毒带,其中M病毒带的吸光度、蛋白浓度及血凝滴度最高,蛋白浓度可达1.2mg/mL,血凝滴度高达1×49。电镜观察显示,L区带为具有血凝活性的质膜和结构疏松的病毒组成,M区带病毒颗粒呈球形、丝状或棒状。同时,有大量空心病毒颗粒存在。H区带与M区带类似,但未发现空心病毒颗粒。纯化的病毒免疫小鼠后可产生具有较高血凝抑制活性的抗体。结论蔗糖密度梯度离心技术可用于流感病毒抗原的制备,且不影响病毒的免疫原性。因此,密度梯度离心法可为流感病毒的基础研究及疫苗开发提供技术支持。
【作者单位】： 陕西省人民医院中心实验室;西安交通大学医学部第三附属医院;陕西省疾病预防控制中心病毒所;
【关键词】： 甲型流感病毒 蔗糖密度梯度超速离心 免疫原性
【基金】：国家科技重大专项传染病监测技术平台项目(No.2013ZX10004202);国家科技重大专项(No.2014ZX10004002-002-005)~~
【分类号】：R373.13
【正文快照】： 甲型流感病毒属于正黏病毒科,流感病毒属,是引起急性呼吸道感染的病原体。疫苗接种是预防流感的有效途径[1]。目前在流感病毒抗原或疫苗制备中,主要通过层析与密度梯度离心法制备[2],近来也有基因重组构建病毒样颗粒获取抗原[3]。本研究用传统的蔗糖密度梯度离心法纯化流感病

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