汉滩病毒糖基化位点全突变重组假病毒的制备及鉴定

发布时间：2017-07-14 12:35

  本文关键词：汉滩病毒糖基化位点全突变重组假病毒的制备及鉴定

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【摘要】：目的构建汉滩病毒(HTNV)包膜糖蛋白(GP)糖基化位点全突变重组假病毒。方法应用一次性多位点突变技术同时突变HTNV GP上5个N-糖基化位点(Gn的N134、N235、N347、N399和Gc的N928),克隆入慢病毒表达载体,与包装质粒共转染293T细胞,包装出重组假病毒颗粒,感染HEK293细胞,采用免疫荧光法检测和鉴定构建的重组假病毒。结果基因序列测定显示,突变体上5个N-糖基化位点均由天冬酰胺(Asn)的编码基因(AAT)突变为谷氨酰胺(Gln)的编码基因(CAG);制备的重组假病毒滴度为4.0×107 TU/ml;免疫荧光检测显示构建的重组假病毒可正确表达HTNV的Gn和Gc蛋白。结论成功构建了含有HTNV包膜糖蛋白5个N-糖基化位点全突变的重组假病毒颗粒,为研究糖基化对HTNV包膜糖蛋白生物学功能的影响创造了条件。
【作者单位】： 第四军医大学学员旅;第四军医大学基础部微生物学教研室;
【关键词】： 汉滩病毒 包膜糖蛋白 糖基化位点全突变体 重组假病毒
【基金】：国家重大传染病防治专项课题(No.2013ZX10004609-002) 国家自然科学基金面上项目(No.30801037)
【分类号】：R373
【正文快照】： ***汉坦病毒属于布尼亚病毒科(Bunyaviridae)的汉坦病毒属(Hantavirus,HV)。根据血清学和基因组信息,该属病毒目前可分为近40种血清型/基因型,我国流行的主要是I型汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)和Ⅱ型汉城型病毒(Seoul virus,SEOV)[1-2]。汉坦病毒可以引起两种严重危害人类生

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本文编号：541091