鲍曼不动杆菌外膜蛋白W的克隆表达及纯化

发布时间：2017-08-07 19:25

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【摘要】：目的通过基因克隆方法制备鲍曼不动杆菌外膜蛋白W(outer membrane protein W,OmpW),为研究其生物学活性及耐药机制奠定实验基础。方法通过PCR方法扩增鲍曼不动杆菌临床株A1株的外膜蛋白W基因(OmpW),构建原核表达载体pET30a/ompW,采用PCR方法和测序鉴定扩增产物。筛选阳性表达载体后转化至大肠埃希菌表达宿主菌BL21中,IPTG诱导表达重组蛋白并进行纯化。结果 pET30a/ompW原核表达重组载体构建成功,基因测序鉴定,其在原核表达系统中高表达,表达产物分子质量单位约为43ku,与预期值相符。表达产物经8mol/L尿素和Tris-HCl处理纯化,得到高纯度的重组OmpW蛋白。结论成功构建鲍曼不动杆菌OmpW蛋白基因重组原核表达系统,并获得高纯度的重组OmpW蛋白,为研究鲍曼不动杆菌外膜蛋白W的生物学活性以及耐药机制奠定了基础。
【作者单位】： 内蒙古医科大学附属医院检验科;内蒙古医科大学病原生物学实验室;
【关键词】： 鲍曼不动杆菌 外膜蛋白W 表达纯化
【基金】：内蒙古自治区自然科学基金项目(No.2013MS1127)
【分类号】：R378.2
【正文快照】： ***鲍曼不动杆菌是一种革兰阴性杆菌,属于条件致病菌,现已成为全球性新型的院内感染病原体,可引起肺炎、脑膜炎、菌血症以及软组织感染等[1-2]。流行病学调查显示,医院鲍曼不动杆菌分离率居高不下,耐多重抗生素鲍曼不动杆菌菌株数量急剧增多[3-5],且有耐受各种抗生素的倾向,其

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