乳酸杆菌对细胞因子及TLR-NF-κB途径的调节作用研究

发布时间：2017-08-07 21:15

  本文关键词：乳酸杆菌对细胞因子及TLR-NF-κB途径的调节作用研究

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【摘要】：乳酸菌作为益生菌,可以通过对抗炎因子和促炎因子的调节发挥抗肠炎作用,研究表明,不同乳酸菌对不同细胞因子的调节作用存在种属性差异。近几年,乳酸杆菌对致病菌S.sonnei刺激HT-29细胞产生细胞因子的调节作用及其作用机制的研究较少,所以本实验以S.sonnei作为炎症刺激,研究乳酸杆菌与HT-29细胞中TLR-NF-κB信号途径的相关性。采用ELISA法研究副干酪乳杆菌副干酪亚种M5、干酪乳杆菌Q8和鼠李糖乳杆菌J10对HT-29产生的多种细胞因子白介素(IL)-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α和IL-12等的调节作用。采用免疫荧光技术和流式细胞术研究了三种乳酸杆菌M5-L、Q8-L和J10-L对HT-29细胞中TLR-NF-κB信号通路的调节作用。实验结果显示,只加S.sonnei的阳性对照组中,IL-1β分泌量为156.3pg/m L,而M5-L、Q8-L和J10-L的预防组中,IL-1β的分泌量分别为118.9pg/m L、80.0 pg/m L和104.9 pg/m L,说明三种乳酸杆菌对炎性因子IL-1β均有显著的抑制。IL-8的分泌量在只加S.sonnei的阳性对照组中,为1096.0pg/m L,而M5-L、Q8-L和J10-L的预防组中,IL-8的分泌量分别为112.7 pg/m L、290.9 pg/m L和213.0 pg/m L,说明三种乳酸杆菌对炎性因子IL-8的分泌均也有显著的抑制。对TNF-α的检测结果显示,三种乳酸杆菌可以促进HT-29细胞中TNF-α的分泌,但分泌量较少。对IL-10的检测结果显示,M5-L和J10-L能显著促进抗炎因子IL-10的分泌。对炎性因子IL-6和IL-12的检测发现,HT-29细胞本身不能产生IL-6和IL-12,且S.sonnei也不能刺激HT-29细胞产生这两种炎性因子。用荧光定量PCR法,对IL-8的m RNA进行检测,结果显示M5-L、Q8-L和J10-L均能显著降低IL-8的m RNA表达,表明三种乳酸杆菌不仅能抑制炎性因子IL-8的分泌,而且也能抑制其m RNA表达。免疫荧光技术检测结果发现,致病菌S.sonnei能促进NF-κB发生核转位,从而促进炎性因子IL-8的产生,三种乳酸杆菌对NF-κB的核转位有一定的抑制作用,但不能完全抑制。流式细胞术检测结果表明,致病菌S.sonnei能刺激诱导HT-29细胞上TLR4表达的提高,三种乳酸杆菌均能抑制S.sonnei刺激导致的HT-29细胞上TLR4表达的提高,从而抑制TLR4介导的信号通路。
【关键词】：乳酸杆菌 细胞因子 TLR-NF-κB信号通路
【学位授予单位】：哈尔滨工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R371
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-10
• 第1章 绪论10-18
• 1.1 课题研究背景及目的意义10-11
• 1.2 乳酸菌菌体对肠道炎症的调控作用研究11-12
• 1.2.1 乳酸菌活菌体对肠道炎症的调控作用11-12
• 1.2.2 乳酸菌死菌体对肠道炎症的调控作用12
• 1.3 乳酸菌的胞外代谢物对肠道炎症的调控作用研究12-14
• 1.3.1 乳酸菌的胞外多肽对肠道炎症的调控作用12-13
• 1.3.2 乳酸菌的代谢物乳酸对肠道炎症的调控作用13-14
• 1.3.3 乳酸菌的活性产物—耐消化酶对肠道炎症的调控作用14
• 1.4 乳酸菌DNA对肠道炎症的调控作用研究14-15
• 1.5 乳酸菌表面成分对肠道炎症的调控作用研究15-16
• 1.5.1 乳酸菌多磷酸盐对肠道炎症的调控作用研究15
• 1.5.2 乳酸菌S层蛋白对肠道炎症的调控作用研究15-16
• 1.6 本课题主要研究内容16-18
• 1.6.1 本课题的技术路线16
• 1.6.2 本课题的研究内容16-18
• 第2章 材料和方法18-29
• 2.1 材料及仪器18-21
• 2.1.1 材料与试剂18-19
• 2.1.2 实验仪器19-20
• 2.1.3 培养基20-21
• 2.1.4 菌种和细胞21
• 2.2 乳酸杆菌和致病菌的菌落计数21-22
• 2.2.1 乳酸菌的菌落计数21-22
• 2.2.2 致病菌的菌落计数22
• 2.3 乳酸杆菌及致病菌S. sonnei对HT-29 细胞的干预处理22-23
• 2.3.1 细胞处理22
• 2.3.2 干预处理22-23
• 2.4 NO试剂盒测HT-29 细胞上清液中NO含量23
• 2.5 ELISA法检测HT-29 细胞分泌的细胞因子含量23-24
• 2.6 荧光定量PCR测定炎性因子IL-8 的m RNA表达量24-27
• 2.7 TLR-NF-κB信号通路的检测27-28
• 2.7.1 免疫荧光法观察NF-κB蛋白的核转位27
• 2.7.2 流式细胞术检测HT-29 细胞上TLR4 的表达27-28
• 2.8 数据处理及绘图28-29
• 第3章 乳酸杆菌对NO及IL-10 和TNF-α 调节作用研究29-39
• 3.1 乳酸杆菌和致病菌的菌落计数29-30
• 3.2 HT-29 细胞上清液中NO含量的变化30-32
• 3.3 HT-29 细胞上清液中抗炎因子IL-10 含量的变化32-35
• 3.4 HT-29 细胞上清液中细胞因子TNF-α 含量的变化35-38
• 3.5 本章小结38-39
• 第4章 乳酸杆菌对炎性因子的调节作用研究39-54
• 4.1 乳酸杆菌对S. sonnei刺激HT-29 细胞分泌IL-1β 的调节39-42
• 4.2 乳酸杆菌对S. sonnei刺激HT-29 细胞分泌IL-8 的调节42-45
• 4.3 乳酸杆菌对炎性因子IL-6 和IL-12 的调节45-49
• 4.4 乳酸杆菌对HT-29 细胞产生IL-8 的m RNA表达的调节49-52
• 4.4.1 RNA质量及引物特异性鉴定49-50
• 4.4.2 乳酸杆菌对IL-8 的mRNA表达的调节50-52
• 4.5 本章小结52-54
• 第5章 乳酸杆菌对TLR-NF-κB信号通路的调节作用54-61
• 5.1 乳酸杆菌对HT-29 细胞中NF-κB p65 核转位的调节54-58
• 5.2 乳酸杆菌对HT-29 细胞上TLR4 表达的调节58-60
• 5.3 本章小结60-61
• 结论61-62
• 参考文献62-69
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文69-71
• 致谢71

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 陈曦;欧阳钦;;HT-29细胞Toll通路相关分子表达与调控的研究[J];四川大学学报(医学版);2010年04期

2 Sahar K Hegazy;Mohamed M El-Bedewy;;Effect of probiotics on pro-inflammatory cytokines and NF-κB activation in ulcerative colitis[J];World Journal of Gastroenterology;2010年33期

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本文编号：636743