抗体偶联药物抗HER2单抗-MCC-DM1质控方法的建立

发布时间：2017-08-30 06:45

  本文关键词：抗体偶联药物抗HER2单抗-MCC-DM1质控方法的建立

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【摘要】：目的:建立抗体偶联药物(ADC)抗人表皮生长因子受体-2(HER2)单抗-马来酰亚胺基-环己烷-1-羧化物(MCC)-美登素衍生物(DM1)(trastuzumab-DM1,T-DM1)的质控方法。方法:利用人乳腺癌BT-474细胞增殖抑制实验测定T-DM1的生物学活性;利用生物分子间相互作用分析核心技术(biomolecular interaction analysis core-technology,BIAcore)测定其结合常数(KD);利用HER2抗原和抗DM1抗体双夹心酶联免疫法(ELISA)对T-DM1进行鉴别;利用液质联用法和紫外分光光度法测定药物抗体偶联比(DAR);利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定游离药物DM1的含量;利用十二烷基磺酸钠-毛细管凝胶电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate,CE-SDS)和分子排阻色谱(size exclusion-high performance liquid chromatography,SE-HPLC)分析纯度;利用成像毛细管等点聚焦电泳(i CIEF)分析电荷异质性,其他各项指标均符合现行版中国药典的要求及其他相关要求。结果:T-DM1生物学活性相对效价为(94.04±2.60)%,KD为(1.03±0.02)E-9 mol·L-1,RSD均小于5%;ELISA鉴别为阳性;液质联用法和紫外分光光度法测得的DAR分别为3.21及3.25;RP-HPLC法测定游离药物DM1的含量为(0.822 2±0.050 5)%,RSD小于10%;非还原CE-SDS主峰面积为(96.63±0.07)%,RSD为0.07%;SE-HPLC主峰面积为(97.65±0.005 8)%,RSD为0.005 8%;i CIEF分析可以将每个偶联数的抗体药物分开,达到很好的鉴别。结论:建立ADC中T-DM1质控方法具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,为我国ADC的质量检测提供了参考依据。
【作者单位】： 中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室;
【关键词】： 抗体偶联药物(ADC) 抗HER单抗-MCC-DM(T-DM) 曲妥珠单抗 美登素 药物抗体偶联比 生物学活性 酶联免疫(ELISA) 鉴别 纯度测定
【基金】：国家“重大新药创制”科技重大专项资助项目(No.2014ZX09304311-001,No.2012ZX09304010) 中国食品药品检定研究院学科带头人培养基金课题(2013X3)
【分类号】：R392-33
【正文快照】： 利用抗体实现细胞毒性药物靶向治疗的观念胞因有丝分裂障碍而死亡的化合物,机制和长春碱可追溯到20世纪初[1]。近年来,随着基因工程技类药物相同,但活性是后者的20~100倍[12-13]。术、抗体制备技术的成熟,以及新型化学连接技术的T-DM1既保留了曲妥珠单抗依赖性的细胞增殖抑出

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