神经酰胺在MCLR引起的HL7702细胞PP2A亚基及其底物改变中作用的探讨

发布时间：2017-09-01 16:30

  本文关键词：神经酰胺在MCLR引起的HL7702细胞PP2A亚基及其底物改变中作用的探讨

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【摘要】：研究背景：微囊藻毒素LR (MCLR, microcystin-LR)是微囊藻毒素中存在最为普遍且毒性作用最明显的一种。MCLR是蛋白磷酸酶2A(PP2A, protein phoshatase2A)的强抑制剂,对PP2A的抑制作用可能是造成其致毒作用机制错综复杂的原因之一。神经酰胺是细胞对外界环境刺激产生的一类主要的第二信使,PP2A/B55a亚基和PP2A/B56a亚基可被神经酰胺激活。本实验室的前期研究发现,MCLR能够刺激人胚肾细胞HEK293和小鼠肾脏中神经酰胺水平的升高,升高的神经酰胺上调了HEK293细胞中PP2A/B55a以及PP2A/B56a这两种调节亚基的蛋白水平。本研究拟探讨MCLR染毒入肝细胞HL7702后神经酰胺在PP2A亚基改变及其底物蛋白磷酸化水平改变中的作用。 研究方法：以人肝细胞系HL7702为模型,对细胞用MCLR染毒及用神经酰胺合成酶抑制剂Desipramine (DESI)处理,应用免疫荧光技术检测神经酰胺水平,用免疫印迹技术检测PP2A各亚基蛋白水平及其底物MAPK、c-myc、Raf-1、Akt、 bcl-2、Ezrin、VASP和Hsp27的总蛋白及磷酸化蛋白水平,用Hoechst33342染核方法检测细胞凋亡。 研究结果：1MCLR对HL7702细胞处理24小时后,神经酰胺水平明显升高。用10μM DESI与MCLR共处理HL7702细胞后,神经酰胺水平的上升得到了抑制。2. MCLR与DESI共处理细胞后,MCLR引起的PP2A/B55a和PP2A/B56a蛋白水平上调效应消除。但是DESI共处理不影响MCLR引起的PP2A/A和PP2A/C亚基蛋白水平的变化。3MCLR影响了PP2A底物MAPK c-myc、Raf-l、Akt、bcl-2、Ezrin、VASP、Hsp27的磷酸化水平,其中c-myc、Akt、bcl-2、Hsp27在加入DESI后其磷酸化水平的升高被抑制。4.虽然bcl-2的磷酸化水平上升,但未检测出MCLR对HL7702细胞的细胞凋亡产生可见影响,DESI的加入也没有改变这个结果。 研究结论：HL7702细胞在受到MCLR刺激后,主要经神经酰胺合成途径使神经酰胺水平升高；升高的神经酰胺上调了PP2A/B55a以及PP2A/B56a这两种调节亚基的蛋白水平；与此同时,也影响了MCLR引起的PP2A底物c-myc、Akt、 bcl-2、Hsp27蛋白磷酸化水平的升高。表明在MCLR的作用过程中,神经酰胺可能起到了一定的调节作用,但具体的机制还有待深入研究。
【关键词】：微囊藻毒素 人肝细胞 神经酰胺 蛋白磷酸酶2A 丝裂原激活的蛋白激酶 凋亡相关蛋白 骨架相关蛋白 细胞凋亡
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 致谢4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 缩略词表9-10
• 目录10-12
• 1 前言12-16
• 2 实验材料16-21
• 3 实验方法21-25
• 4 实验结果25-45
• 4.1 MCLR刺激HL7702细胞的神经酰胺水平升高25
• 4.2 神经酰胺合成酶抑制剂DESI抑制神经酰胺的合成25-28
• 4.3 MCLR刺激HL7702细胞调节PP2A亚基水平可能与神经酰胺有关28-30
• 4.4 神经酰胺在MCLR诱导的MAPK通路磷酸化水平改变中的作用30-36
• 4.4.1 神经酰胺没有影响MCLR引起的Raf-1磷酸化水平的改变30-32
• 4.4.2 神经酰胺没有影响MCLR引起的ERK1/2,p38,JNK磷酸化水平的改变32
• 4.4.3 MCLR引起MAPK下游转录因子c-myc的磷酸化可能与神经酰胺有关32-36
• 4.5 神经酰胺在MCLR影响细胞存活/凋亡相关蛋白磷酸化水平中的作用36-39
• 4.5.1 MCLR影响Akt蛋白磷酸化水平可能与神经酰胺有关36
• 4.5.2 MCLR影响bcl-2蛋白水平及其磷酸化水平可能与神经酰胺有关36-39
• 4.6 神经酰胺在MCLR影响细胞骨架相关蛋白磷酸化水平中的作用39-44
• 4.6.1 神经酰胺没有影响MCLR引起的Ezrin磷酸化水平的改变39
• 4.6.2 神经酰胺没有影响MCLR引起的VASP磷酸化水平的改变39-42
• 4.6.3 MCLR影响Hsp27蛋白磷酸化水平可能与神经酰胺有关42-44
• 4.7 MCLR对HL7702细胞凋亡没有影响44-45
• 5 讨论45-51
• 5.1 MCLR通过刺激HL7702细胞生成神经酰胺来调节PP2A亚基的蛋白水平45-46
• 5.2 MCLR激活MAPK通路及其引起下游转录因子o-myc的磷酸化可能与神经酰胺有关46-48
• 5.3 MCLR影响细胞存活/凋亡相关蛋白可能与神经酰胺有关48
• 5.4 MCLR影响细胞骨架相关蛋白可能与神经酰胺有关48-51
• 6 结论51-52
• 参考文献52-59
• 综述59-70
• 摘要59
• 1 14-3-3蛋白的分子结构59-60
• 2 14-3-3蛋白的功能60-62
• 3 14-3-3蛋白的作用机制62-63
• 4 14-3-3蛋白与肿瘤的关系63-64
• 5 展望64-65
• 参考文献65-69
• Abstract69-70
• 作者简历及在学期间参加的科研工作70

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 ;Effect of microcystin-LR on protein phosphatase 2A and its function in human amniotic epithelial cells[J];Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology);2011年12期

2 张金强,王妍,王涛,杜芝燕,徐元基,陆应麟;肺巨细胞癌高低转移株差异表达基因的鉴定[J];中华肿瘤杂志;2004年10期

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本文编号：773171