重组慢病毒载体介导KSHV分子开关蛋白Rta在BCBL-1细胞中的表达及其功能鉴定

发布时间：2017-10-11 16:26

  本文关键词：重组慢病毒载体介导KSHV分子开关蛋白Rta在BCBL-1细胞中的表达及其功能鉴定

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【摘要】：目的:构建含卡波氏肉瘤病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)分子开关蛋白,即复制和转录激活蛋白(replication and transcriptional activator,Rta)基因的重组慢病毒载体。方法:从真核表达质粒pcDNA3.1-Rta中扩增出Rta基因,插入pHAGE-CMV-MCS-IzsGreen中,构建重组慢病毒载体pHAGE-Rta。将重组慢病毒骨架质粒pHAGE-Rta与包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共转染293 T细胞,通过荧光显微镜观察表达绿色荧光蛋白的293 T细胞占总数的百分比。收集病毒悬液,采用梯度稀释法测定病毒滴度。以不同感染复数(MOI)的Lentivirus-Rta病毒量感染BCBL-1细胞,72 h后检测Rta基因的表达,同时通过蛋白质印迹和病毒颗粒释放实验检测KSHV裂解期蛋白病毒白细胞介素-6(vIL-6)的表达及子代病毒颗粒的产出。结果:从真核表达质粒pcDNA3.1-Rta中扩增出Rta基因,插入pHAGE-CMV-MCS-IzsGreen后,酶切鉴定和核酸序列测定证实重组慢病毒骨架质粒pHAGE-Rta构建成功。通过慢病毒包装3质粒表达系统获得了表达Rta基因的重组慢病毒,滴度约为2×107efu/mL。以不同MOI的重组慢病毒感染BCBL-1细胞,72 h后可检测到外源基因编码Rta蛋白的表达,且其表达能够上调KSHV vIL-6的表达水平及促进子代病毒颗粒的释放。结论:成功构建了含Rta基因的慢病毒表达载体,获得的重组病毒能够有效地感染BCBL-1细胞,并发挥激活KSHV裂解期复制的生物学功能。
【作者单位】： 南京医科大学微生物与免疫学系;
【关键词】： 慢病毒 复制和转录激活蛋白 卡波氏肉瘤病毒 病毒复制
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81371824)
【分类号】：R373
【正文快照】： 人类疱疹病毒8型又称为卡波氏肉瘤病毒(Ka-posi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV),是一种与卡波氏肉瘤(Kaposi's sarcoma,KS),多中心卡斯特莱曼病和原发性渗出性淋巴瘤(primary effusionlymphoma,PEL),即体腔渗出性淋巴瘤(body cavity-based lymphoma,BCBL)的发生高度

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

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【共引文献】

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【相似文献】

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本文编号：1013583