基于颜色判定的环介导等温扩增方法检测EV71

发布时间：2017-10-12 08:32

  本文关键词：基于颜色判定的环介导等温扩增方法检测EV71

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【摘要】：建立了一种基于颜色判定的灵敏、快速和经济的逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)方法应用于肠道病毒71(enterovirus 71,EV71)基因检测。针对EV71病毒VP1基因特异性序列的设计出6条特异引物,在等温条件下(63℃)进行扩增反应60min。在扩增前加入染料羟基萘酚蓝(HNB)作为反应指示剂,以其颜色变化作为结果判断标准。进行特异性/灵敏度分析,同时与RT-PCR方法进行比较,并对93份疑似患者中咽拭子的病毒核酸进行了检测。通过颜色变化能观察到LAMP扩增产物的存在,且与柯萨奇病毒A16型(CA16)、轮状病毒、诺如病毒无交叉反应发生。所建立的RT-LAMP检测方法灵敏,灵敏度为500copy/tube,与定量PCR灵敏度相同。93份咽拭子标本中,RT-LAMP检测为46份阳性,荧光定量PCR检测有为44份阳性,二者统计学无显著差异。RTLAMP是一种快速、敏感、特异、经济的方法,适合用于基层医疗机构临床检测。
【作者单位】： 河南大学淮河医院儿科;河南大学医学院免疫学研究所;
【关键词】： 逆转录-环介导等温扩增技术 肠道病毒型 手足口病
【分类号】：R392-33
【正文快照】： 2011年全国手足口病的患病人数是1 619 706人,死亡509人。目前,该病已经成为全国高发传染病之一,发病范围广、影响大,发病率呈明显上升趋势[1]EV71与手足口病(hand,foot and mousedisease,HFMD)的暴发流行关系密切,并可导致无菌性脑脊髓膜炎、脑炎、心肌炎和脑麻痹后遗症等严

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本文编号：1017715